發(fā)布時間：2017-08-01 07:22

  本文關(guān)鍵詞：增殖的組織細(xì)胞中糖代謝增強

  更多相關(guān)文章： 糖代謝 關(guān)鍵酶 細(xì)胞增殖 新生內(nèi)膜 大腸癌

【摘要】：目的:糖代謝是生物體內(nèi)普遍存在的能量代謝過程。在血管損傷和惡性腫瘤組織中的糖代謝活躍,以滿足細(xì)胞增殖的需要。目前,有關(guān)糖代謝異常與增殖性疾病的關(guān)系仍尚未完全清晰。本文通過觀察小鼠頸總動脈內(nèi)皮損傷模型、惡性腫瘤及腫瘤細(xì)胞系中糖代謝途徑關(guān)鍵酶的活性變化,探討糖代謝與細(xì)胞增殖的關(guān)系,為理解增殖細(xì)胞的糖代謝規(guī)律提供實驗依據(jù)。方法:1隨機選取C57BL/6小鼠,雄性,8~12周,13只。異氟烷吸入式麻醉,行單側(cè)頸總動脈結(jié)扎,設(shè)為血管損傷組;對側(cè)頸總動脈不作處理設(shè)為假手術(shù)組。血管損傷組和假手術(shù)組分別于結(jié)扎術(shù)后14天,心臟灌流后取小鼠頸總動脈并將血管分為兩部分,一部分勻漿,提取組織蛋白,分別用Western blot方法和己糖激酶活性測定試劑盒檢測血管壁中葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)的表達(dá)和己糖激酶(hexokinase,HK)活性;另一部分取材后,進(jìn)行脫水、石蠟包埋、切片、免疫組織化學(xué)染色法檢測糖酵解途徑中最后一個關(guān)鍵酶丙酮酸激酶-2(pyruvate kinase-2,PKM2)的表達(dá)。2收集2014年7月-2015年11月期間河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外二科結(jié)直腸癌的標(biāo)本30例,以結(jié)直腸癌組織標(biāo)本為實驗組,距腫瘤10 cm以外的正常腸粘膜組織為對照組。標(biāo)本分為兩份,一份放入-80℃冰箱中凍存,隨后用Western blot方法檢測標(biāo)本中G6PD、PKM2的表達(dá),用己糖激酶活性測定試劑盒檢測HK活性;另一份放入4%的多聚甲醛組織固定液中固定,隨后進(jìn)行脫水、石蠟包埋、切片及免疫組化染色檢測G6PD及PKM2的表達(dá)。3無菌環(huán)境下培養(yǎng)人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞系HCT116細(xì)胞和人正常結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞系FHC細(xì)胞,用Western blot方法檢測兩種細(xì)胞中G6PD和PKM2的表達(dá),用己糖激酶活性測定試劑盒檢測HK活性。結(jié)果:1 G6PD、PKM2和HK在血管新生內(nèi)膜中的表達(dá)C57BL/6小鼠頸總動脈結(jié)扎損傷后第14天,Western blot結(jié)果顯示,損傷側(cè)G6PD的表達(dá)明顯高于對照側(cè)(P0.05);并且HK活性變化趨勢與G6PD相似,損傷側(cè)HK的活性明顯高于對照(P0.05);免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,損傷側(cè)PKM2的陽性顆粒數(shù)明顯升高(P0.05)。2 G6PD、PKM2和HK在腫瘤組織中的表達(dá)Western blot結(jié)果顯示,30例患者腫瘤組織中G6PD和PKM2的表達(dá)水平高于癌旁正常組織(P0.05)。腫瘤組織中HK活性水平高于癌旁正常組織(P0.05);免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,腫瘤組織中G6PD和PKM2的陽性顆粒數(shù)高于癌旁正常組織(P0.05)。3 G6PD、PKM2和HK在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)Western blot結(jié)果顯示,人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞系HCT116細(xì)胞中G6PD和PKM2的表達(dá)水平高于人正常結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞系FHC細(xì)胞(P0.05);HK活性測定結(jié)果顯示,人結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞系HCT116細(xì)胞中HK活性水平高于人正常結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞系FHC細(xì)胞(P0.05)。結(jié)論:1在血管新生內(nèi)膜和腫瘤組織細(xì)胞中糖代謝關(guān)鍵酶G6PD、PKM2和HK的表達(dá)和活性升高。2在增殖的細(xì)胞中其糖代謝速率加快。
【關(guān)鍵詞】：糖代謝 關(guān)鍵酶 細(xì)胞增殖 新生內(nèi)膜 大腸癌
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-9
• 材料與方法9-17
• 結(jié)果17-18
• 附圖18-29
• 附表29-30
• 討論30-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 綜述 糖酵解酶在非代謝功能中與癌癥細(xì)胞增殖的關(guān)系..38-55
• 參考文獻(xiàn)47-55
• 致謝55-56
• 個人簡歷56

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本文編號：603075