本文關(guān)鍵詞：攜帶IP-10基因雙歧桿菌載體的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建并鑒定攜帶人γ干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10)基因的大腸桿菌-雙歧桿菌穿梭分泌型表達(dá)載體,探索抗腫瘤基因治療的新型載體。方法用改良型MRS雙歧桿菌選擇培養(yǎng)基,從人新鮮糞便分離長雙歧桿菌,通過PCR方法克隆雙歧桿菌的內(nèi)源性阿拉伯糖苷酶的啟動子和分泌性信號肽DNA序列(ara)。然后以大腸桿菌質(zhì)粒pBAD-A和pBS-T為基礎(chǔ),以ara啟動子取代原有的啟動子,以綠色熒光蛋白基因(GFP)作為報告基因,構(gòu)建大腸桿菌-雙歧桿菌穿梭質(zhì)粒pBS-BPP-ara-GFP。通過PCR方法擴(kuò)增真核表達(dá)載體pBLAST49-hIP-10質(zhì)粒中的IP-10基因,將其克隆到穿梭質(zhì)粒pBS-BPP-ara-GFP中,采用電轉(zhuǎn)化法將正確克隆的大腸桿菌-雙歧桿菌穿梭質(zhì)粒導(dǎo)入雙歧桿菌中,并以L-arabinose誘導(dǎo)表達(dá)。在激光共聚焦顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)基因雙歧桿菌中GFP蛋白的表達(dá);運用免疫蛋白質(zhì)印跡(Western blot)檢測轉(zhuǎn)基因雙歧桿菌中IP-10的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果含GFP基因的轉(zhuǎn)基因雙歧桿菌在激光共聚焦顯微鏡下觀察到綠色熒光。含IP-10基因的轉(zhuǎn)基因雙歧桿菌經(jīng)Western blot檢測到分子量為8.47 kD的目的蛋白條帶。結(jié)論成功構(gòu)建能表達(dá)IP-10蛋白的穿梭質(zhì)粒載體pBS-BPP-ara-GFP-IP-10,為IP-10轉(zhuǎn)基因雙歧桿菌的抗腫瘤機(jī)制及其抑瘤效應(yīng)的研究奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院;廣東省深圳市人民醫(yī)院消化內(nèi)科;廣東省深圳市兒童醫(yī)院消化內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 長雙歧桿菌 綠色熒光蛋白基因 γ干擾素誘導(dǎo)蛋白
【基金】：廣東省深圳市醫(yī)療衛(wèi)生系統(tǒng)科技計劃重點項目(編號:深科信[2005]209號-4)
【分類號】：R371
【正文快照】： 雙歧桿菌是人體內(nèi)的正常生理性細(xì)菌,屬專項厭氧菌,定殖于腸道內(nèi),是腸道的優(yōu)勢菌和有益菌。它不僅具有改善腸道微生態(tài)環(huán)境,促進(jìn)營養(yǎng)吸收的作用,而且還有調(diào)節(jié)免疫功能、分解有毒的代謝中間產(chǎn)物和防治腫瘤的作用[1-2]。研究發(fā)現(xiàn),低氧區(qū)的存在是實體瘤的一個特性,而厭氧菌具有趨

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王澤宙,邱全勝;綠色熒光蛋白基因mgfp4在水稻愈傷組織中的瞬時表達(dá)[J];北京師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2000年03期

2 裴子飛，，杜全勝，齊義鵬，朱應(yīng);突變型綠色熒光蛋白基因在昆蟲細(xì)胞和幼蟲中的表達(dá)[J];武漢大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);1999年02期

3 彭瑩;張曉梅;雷雪明;程軼U

本文編號：603066