本文關(guān)鍵詞：人源抗破傷風(fēng)毒素單鏈二硫鍵穩(wěn)定抗體的重組設(shè)計與表達

  更多相關(guān)文章： 單鏈二硫鍵穩(wěn)定抗體 親和力 原核表達 破傷風(fēng)痙攣毒素C端

【摘要】：目的構(gòu)建人源抗破傷風(fēng)毒素重鏈C端單鏈二硫鍵穩(wěn)定抗體原核表達載體,并進行原核表達和生物學(xué)特性鑒定。方法采用PCR定點突變的方法,獲得二硫鍵穩(wěn)定的抗破傷風(fēng)毒素重鏈C端(TeNT-Hc)單鏈抗體基因(27G-scdsFv)。連接pET22b(+)載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)工程菌,IPTG誘導(dǎo)表達,SDS-PAGE、Western blot法鑒定表達產(chǎn)物。ELISA檢測27G-scdsFv體外抗原特異結(jié)合活性和抗體相對穩(wěn)定性;非競爭酶免法檢測抗體親和力。采用免疫熒光法檢測27G-scdsFv體外中和活性。結(jié)果測序結(jié)果顯示獲得正確的27G-scdsFv基因。原核表達scdsFv以包涵體形式存在,表達量約占菌體總蛋白的50%。復(fù)性后的27G-scdsFv保持了與TeNT-Hc的特異結(jié)合活性,親和力較其scFv形式略有提升,KD=0.93×10-7mol/L,1 L培養(yǎng)物可獲得5 mg scdsFv蛋白。27G-scdsFv的穩(wěn)定性較scFv形式明顯增強。27G-scdsFv在體外可以明顯抑制TeNT-Hc與神經(jīng)元細胞的結(jié)合。結(jié)論成功構(gòu)建人源抗破傷風(fēng)毒素重鏈C端單鏈二硫鍵穩(wěn)定抗體原核表達載體,并獲得有活性的目的蛋白,為27G-scdsFv的進一步生物學(xué)功能研究奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所疫苗與抗體工程研究室 全軍生物武器損傷防治藥物重點實驗室;解放軍第302醫(yī)院臨床檢驗醫(yī)學(xué)中心 全軍感染病臨床實驗診斷中心;解放軍第302醫(yī)院感染性疾病研究與診療中心;
【關(guān)鍵詞】： 單鏈二硫鍵穩(wěn)定抗體 親和力 原核表達 破傷風(fēng)痙攣毒素C端
【基金】：國家杰出青年科學(xué)基金(81025018) 國家自然科學(xué)基金青年基金(81102360,81172980)
【分類號】：R392.12
【正文快照】： 破傷風(fēng)桿菌痙攣毒素與同菌屬的肉毒桿菌神經(jīng)毒素均屬于A類戰(zhàn)劑,前者毒性僅次于后者,是已知第二強的生物毒素[1]。破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌產(chǎn)生的痙攣毒素由A、B、C三個片段組成,其中C片段為其重鏈C端(TeNT-Hc),介導(dǎo)痙攣毒素向神經(jīng)細胞表面受體-神經(jīng)節(jié)苷脂的聚集,具有結(jié)合神經(jīng)細胞

【二級參考文獻】

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【相似文獻】

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本文編號：601687