本文關(guān)鍵詞：抗人CD86單鏈抗體的基因克隆、表達(dá)及結(jié)合活性分析

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【摘要】：目的構(gòu)建并在CHO細(xì)胞中表達(dá)抗人CD86單鏈抗體(CD86-scFv),研究該抗體與抗原的結(jié)合特性及介導(dǎo)的生物學(xué)功能。方法從分泌鼠源CD86抗體的雜交瘤細(xì)胞中克隆出VH和VL基因,構(gòu)建含有前導(dǎo)肽L-VH-Linker-VL抗體編碼基因的表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞。經(jīng)篩選高分泌株并擴(kuò)大培養(yǎng)后收集上清進(jìn)行純化。流式細(xì)胞術(shù)分析CD86-scFv對(duì)不同細(xì)胞膜型CD86分子的識(shí)別及與鼠源親本抗體1D1的競(jìng)爭(zhēng)抑制效應(yīng)。MTT法分析CD86-scFv與Raji細(xì)胞表達(dá)的CD86結(jié)合后對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。結(jié)果獲得了穩(wěn)定表達(dá)抗人CD86-scFv的CHO細(xì)胞株及相應(yīng)抗體。CD86-scFv與CD86基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株L929-CD86、天然表達(dá)CD86分子的人B系淋巴瘤細(xì)胞Raji和Daudi細(xì)胞的陽(yáng)性結(jié)合率分別為67.0%、72.3%和80.5%。CD86-scFv對(duì)鼠源親本抗體1D1具有競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合能力,將CD86-scFv(終濃度20μg/mL)加入Raji細(xì)胞共同培養(yǎng)72 h時(shí)的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率為28.3%。結(jié)論成功構(gòu)建了穩(wěn)定分泌抗人CD86-scFv的CHO細(xì)胞株(命名為SA-IV)。該抗體能夠識(shí)別CD86分子并具有良好的生物學(xué)活性。
【作者單位】： 蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部免疫學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： CD 單鏈抗體 真核表達(dá)
【基金】：科技部科技重大專項(xiàng)(2009ZX09103-705) 蘇州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(SYS201104)
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： CD86(又稱B7-2)是表達(dá)在抗原提呈細(xì)胞(antigen-presenting cell,APC)表面的重要共刺激分子。其受體是表達(dá)在T細(xì)胞表面的CD28分子。CD86與CD28結(jié)合轉(zhuǎn)導(dǎo)的信號(hào),對(duì)T細(xì)胞的活化、增殖與效應(yīng)發(fā)揮重要作用[1-2]。由于CD86分子表達(dá)的時(shí)相早且豐度高,故被認(rèn)為是在免疫反應(yīng)初期決定T細(xì)

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 陳潔;孫中文;;CD80和CD86介導(dǎo)的共刺激信號(hào)的比較及其生物學(xué)作用[J];國(guó)際免疫學(xué)雜志;2006年01期

2 陶然;石云杰;孫中文;馬泓冰;徐穎;程鋼;孫瑋麗;周立峰;邱玉華;張學(xué)光;;鼠抗人B7-2單克隆抗體的研制及生物學(xué)特性研究[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2006年03期

3 胡玲玲;徐耀瑜;陳永井;馬泓冰;程鋼;劉玉華;王艷茹;孫杰;陳明心;邱玉華;;抗人CD86人-鼠嵌合抗體的構(gòu)建及在CHO細(xì)胞的表達(dá)[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2008年02期

4 郭靜雅;陳昌友;王志強(qiáng);張彥軍;黃賽男;朱華亭;邱玉華;;人CXCR3B基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建、鑒定及生物學(xué)功能研究[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年12期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 胡靜平;董海輝;邱玉華;陳永井;王文兵;黃光鎂;吳小鋒;朱江;;鼠抗人B7-2分子單鏈抗體基因的構(gòu)建及其在家蠶中的表達(dá)[J];蠶業(yè)科學(xué);2010年02期

2 段杰林;楊冠;尹杰;何邵平;王磊;黃興國(guó);張彬;李鐵軍;;腸道樹(shù)突狀細(xì)胞的作用機(jī)制及益生菌對(duì)其影響[J];動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2013年01期

3 董海輝;邱玉華;陳永井;胡靜平;黃光鎂;朱江;;抗人B7-2單鏈抗體基因的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的表達(dá)[J];科技通報(bào);2010年03期

4 王勇杰;周健;羅宜人;孔軍;沈毅;;食管癌及其區(qū)域淋巴結(jié)組織樹(shù)突狀突細(xì)胞與Th1/Th2細(xì)胞因子表達(dá)的研究[J];中華腫瘤防治雜志;2009年20期

5 于寧;蔣正剛;鄭秀娟;曹清華;徐薇;王纓;儲(chǔ)以微;熊思東;;基于基因免疫制備抗人絨毛膜促性腺激素β亞基單克隆抗體及其特性研究[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2007年03期

6 陶然;錢齊宏;馬泓冰;石云杰;孫中文;程鋼;孫瑋麗;張學(xué)光;邱玉華;;人可溶性B7-2分子的定量檢測(cè)及應(yīng)用[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2007年05期

7 胡玲玲;徐耀瑜;陳永井;馬泓冰;程鋼;劉玉華;王艷茹;孫杰;陳明心;邱玉華;;抗人CD86人-鼠嵌合抗體的構(gòu)建及在CHO細(xì)胞的表達(dá)[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2008年02期

8 楊揚(yáng);張大鵬;郭懷祖;吳蘭;聶麗;錢衛(wèi)珠;李博華;;抗CD20嵌和抗體的體外生物學(xué)活性研究[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2010年02期

9 楊春;張婉瑩;梁紅艷;姜曉峰;;pEGFP-C3/SUMF2重組真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在人支氣管上皮細(xì)胞中的表達(dá)[J];中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志;2012年03期

10 鄭英;謝林俊;張露萍;王海燕;孫紅亞;梁虹;賈筱琴;胡艷秋;;人RUVBL2真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在HeLa細(xì)胞中的表達(dá)[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年06期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李保東;胃癌總RNA轉(zhuǎn)染樹(shù)突狀細(xì)胞及聯(lián)合胸腺肽α1抗胃癌免疫的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 胡玲玲;CD86人—鼠嵌合抗體的構(gòu)建、表達(dá)及其生物學(xué)活性的初步研究[D];蘇州大學(xué);2008年

2 張毅;燒傷后單核細(xì)胞表面分子CD86變化與炎癥反應(yīng)的關(guān)系[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

3 劉玉華;抗人B7-2人—鼠嵌合抗體的制備及抗腫瘤作用研究[D];蘇州大學(xué);2009年

4 王艷茹;抗人B7-1人—鼠嵌合抗體的制備及生物學(xué)功能研究[D];蘇州大學(xué);2009年

5 董海輝;抗人B7-2單鏈抗體基因的構(gòu)建及表達(dá)研究[D];蘇州大學(xué);2009年

6 沈曉東;經(jīng)RNA干擾技術(shù)修飾的樹(shù)突狀細(xì)胞免疫功能的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

7 韓琳;牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)rap-1基因的克隆與真核表達(dá)[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

8 李亞其;IL-1β、IL-6、IL-10在腸易激綜合征患者中的表達(dá)及臨床意義[D];中南大學(xué);2012年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 居頌文,劉琳,居頌光,於葛華,潘建忠,邱玉華,張學(xué)光;鼠抗人CD28功能性單克隆抗體的研制及其生物學(xué)特性的鑒定[J];上海免疫學(xué)雜志;2003年05期

2 邱玉華,趙文寶,孫中文,於葛華,石云杰,朱華亭,謝煒,張學(xué)光;激發(fā)型CD28單抗誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞凋亡的作用研究[J];上海免疫學(xué)雜志;2003年06期

3 陶然;石云杰;孫中文;馬泓冰;徐穎;程鋼;孫瑋麗;周立峰;邱玉華;張學(xué)光;;鼠抗人B7-2單克隆抗體的研制及生物學(xué)特性研究[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2006年03期

4 孫杰;劉玉華;陳永井;郭靜雅;陳昌友;胡玲玲;陳明心;邱玉華;;小鼠CXCR3基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建、鑒定及生物學(xué)功能研究[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2010年07期

5 孫杰;劉玉華;陳永井;郭靜雅;陳昌友;胡玲玲;陳明心;杜陽(yáng)陽(yáng);徐耀瑜;邱玉華;;人CXCR3基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建、鑒定及初步功能研究[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2010年05期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 樊建勇,王剛,夏汝山,陳宇萍,高天文,劉玉峰;人源性抗角蛋白單鏈抗體在巴氏畢赤酵母的分泌表達(dá)[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2005年09期

2 陳昌友;朱華亭;郭靜雅;黃莉;張彥軍;黃賽男;邱玉華;;抗人CD80雙價(jià)抗體的構(gòu)建、表達(dá)及生物學(xué)功能初步研究[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2011年03期

3 李南林;阻斷CD86下調(diào)Th2應(yīng)答以改善碩大利什曼原蟲(chóng)感染癥狀[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).寄生蟲(chóng)病分冊(cè);1997年06期

4 唐勇,甄永蘇;抗Ⅳ型膠原酶單鏈抗體的表達(dá)及其對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲的抑制作用[J];癌癥;2001年08期

5 董軍,黃強(qiáng),蘭青,周麗英,王愛(ài)東;PCR定點(diǎn)誘變改造低效價(jià)抗膠質(zhì)瘤單克隆抗體的初步報(bào)告[J];江蘇醫(yī)藥;2001年11期

6 夏春鳳;;艾滋病研究的某些進(jìn)展[J];傳染病信息;1994年02期

7 閆巖，汪美先，徐志凱，尹文，汪力亞，王海濤，，祝道成，張勁翼;單克隆抗體3D8可溶性單鏈抗體的表達(dá)[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1995年01期

8 楊銀輝;單鏈抗體的研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;1996年03期

9 沈樹(shù)泉,周筱梅,黃強(qiáng),許志元,王愛(ài)東,杜子威;抗人腦膠質(zhì)瘤單克隆抗體SZ39單鏈抗體的構(gòu)建及初步表達(dá)[J];中華神經(jīng)外科雜志;1997年05期

10 ;巨噬細(xì)胞系的輔助分子[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).免疫學(xué)分冊(cè);1997年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 孫娜娜;王欲曉;周麗君;王剛;;人源性抗大皰性類天皰瘡抗原BP180-NC16A單鏈抗體的構(gòu)建及表達(dá)[A];2009全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

2 王長(zhǎng)軍;唐家琪;李先富;潘秀珍;操敏;;抗人紅細(xì)胞血型抗原噬菌體單鏈抗體的研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

3 張惠中;;細(xì)胞內(nèi)生成的抗整合酶單鏈抗體阻斷HIV-1復(fù)制的實(shí)驗(yàn)研究[A];新世紀(jì) 新機(jī)遇 新挑戰(zhàn)——知識(shí)創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（上冊(cè)）[C];2001年

4 王洪利;舒建昌;;單鏈抗體在肝臟疾病中應(yīng)用的研究進(jìn)展[A];廣東省肝臟病學(xué)會(huì)2007年年會(huì)論文集[C];2007年

5 汪世華;胡開(kāi)輝;楊燕凌;邱君志;;基因工程單鏈抗體研究[A];2005全國(guó)第二屆核酸疫苗研討會(huì)論文集[C];2005年

6 林志偉;汪世華;王宗華;;抗脫氧雪腐鐮刀菌烯醇單鏈抗體(DON-ScFv)在枯草芽孢桿菌中高效表達(dá)與分泌[A];中國(guó)生物工程學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)暨全國(guó)生物反應(yīng)器學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2006年

7 王欲曉;喬媛媛;周麗君;;人源性抗蓖麻單鏈抗體的分離純化和活性鑒定[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

8 楊燕凌;;酶(蛋白)融合技術(shù)研究[A];華東地區(qū)農(nóng)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)暨福建省科協(xié)第七屆學(xué)術(shù)年會(huì)農(nóng)業(yè)分會(huì)場(chǎng)論文集[C];2007年

9 張德新;趙澎濤;夏琳;樊代明;;Her-2/neu單鏈抗體-caspase-3融合蛋白介導(dǎo)的特異性人胃癌細(xì)胞調(diào)亡[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第12次全國(guó)內(nèi)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

10 齊永華;張素霞;吳聰明;沈建忠;;單鏈抗體技術(shù)在獸藥殘留檢測(cè)方面的研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)藥理毒理學(xué)分會(huì)第十次研討會(huì)論文摘要集[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 何珊;搏擊市場(chǎng)數(shù)風(fēng)流[N];中國(guó)企業(yè)報(bào);2003年

2 世基投資;國(guó)藥科技(600421)：技術(shù)領(lǐng)先 醫(yī)改受益[N];中國(guó)證券報(bào);2007年

3 張中橋;卵巢癌與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子有關(guān)[N];民族醫(yī)藥報(bào);2000年

4 王振嶺;基因治療腎性貧血有前途[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

5 曹勇;方興未艾的藥物釋放領(lǐng)域[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

6 史鳳芝;肝硬化終遇“殺手”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

7 張中橋;四軍醫(yī)大西京醫(yī)院成功建立胃癌GC9811P-GFP細(xì)胞株[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

8 本報(bào)首席記者 任荃;一石三鳥(niǎo)“里葆多”[N];文匯報(bào);2009年

9 平安;ISO將推行“新托盤計(jì)劃”[N];中國(guó)包裝報(bào);2002年

10 本報(bào)記者 孫晨;醫(yī)藥高新成果專場(chǎng)推介會(huì)精彩紛呈[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2002年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 胡學(xué)軍;抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20-47)單鏈抗體基因克隆及其在大腸桿菌和煙草中的表達(dá)[D];大連理工大學(xué);2002年

2 李月紅;抗ICAM-1單克隆抗體與單鏈抗體的制備及其生物學(xué)特性研究[D];吉林大學(xué);2005年

3 田媛;前列腺癌細(xì)胞結(jié)合單鏈抗體的篩選、表達(dá)純 化及其功能初步研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

4 付建芳;溶藻弧菌抗獨(dú)特型抗體基因工程疫苗的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

5 薛國(guó)柱;人源肝癌單鏈抗體的篩選與鑒定[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

6 陳德宇;前列腺素D合成酶在男性生殖中的基礎(chǔ)及應(yīng)用研究[D];南京師范大學(xué);2005年

7 余自強(qiáng);抗血小板膠原受體糖蛋白VI單克隆抗體的制備和功能研究[D];蘇州大學(xué);2005年

8 熊盛;重組人源抗HBsAg單鏈抗體在大腸桿菌和巴氏畢赤酵母中的表達(dá)、純化與性質(zhì)鑒定[D];華南理工大學(xué);2002年

9 王霞;抗人胃泌素單克隆抗體及其單鏈抗體的研制[D];四川大學(xué);2004年

10 邵長(zhǎng)利;抗人紅細(xì)胞單鏈抗體融合HIV-1gp41抗原肽雙功能分子的制備與鑒定[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐飛虎;抗肺癌單鏈抗體偶聯(lián)綠色熒光蛋白基因的構(gòu)建及表達(dá)研究[D];浙江大學(xué);2003年

2 江淼;抗活化血小板表面受體全套單鏈抗體噬菌體展示文庫(kù)的構(gòu)建和篩選[D];蘇州大學(xué);2003年

3 王溪橋;大容量人源肝癌核糖體展示單鏈抗體庫(kù)的構(gòu)建[D];蘭州大學(xué);2010年

4 張薇;抗T-2毒素單鏈抗體的制備及該毒素對(duì)細(xì)胞毒性影響的初步研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2010年

5 趙蕾;抗雞傳染性支氣管炎病毒單鏈抗體原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其間接ELISA篩選方法的建立[D];上海交通大學(xué);2011年

6 紀(jì)秋野;抗蓖麻毒素單鏈抗體的構(gòu)建、表達(dá)、純化及功能測(cè)定[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2010年

7 劉曉雷;抗伏馬菌素B_1單鏈抗體的制備[D];福建農(nóng)林大學(xué);2010年

8 張慶麗;抗EGFRvⅢ特異性單鏈抗體的構(gòu)建及其靶向性研究[D];南華大學(xué);2011年

9 李燕舞;D28k鈣結(jié)合蛋白基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其表達(dá)效果的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2004年

10 才琳;抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體和單鏈抗體的制備及活性研究[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2010年

本文編號(hào)：583374