本文關(guān)鍵詞：Smoothened慢病毒干擾載體的構(gòu)建及其對(duì)人牙周膜干細(xì)胞增殖與分化的影響

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【摘要】：目的體外構(gòu)建及篩選人Smoothened(SMO)基因的慢病毒干擾載體,使用此載體下調(diào)人牙周膜干細(xì)胞(human periodontal ligament stem cells,PDLSCs)中SMO基因表達(dá)并檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖與分化的影響。方法針對(duì)人SMO基因設(shè)計(jì)3條干擾序列,構(gòu)建RNA干擾慢病毒載體,在293FT細(xì)胞中包裝病毒液并轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)干擾效率,得到具有最佳干擾效率的病毒后,轉(zhuǎn)染PDLSCs,用Western blot檢測(cè)其對(duì)PDLSCs中SMO基因的干擾效果及對(duì)細(xì)胞分化的影響,CCK-8法檢測(cè)其對(duì)PDLSCs增殖的影響。結(jié)果成功構(gòu)建3個(gè)SMO慢病毒干擾載體(pGP-SMO1、pGP-SMO2、pGP-SMO3),通過轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞并進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)后,得到pGP-SMO1具有最佳干擾效率,轉(zhuǎn)染后SMO mRNA水平下降到對(duì)照的(28.5±2.5)%。利用此病毒能夠很好地轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的PDLSCs,并使PDLSCs中SMO蛋白水平下降80%。進(jìn)一步檢測(cè)細(xì)胞增殖發(fā)現(xiàn),與未轉(zhuǎn)染組比較,SMO下調(diào)后PDLSCs增殖變慢[(1.09±0.20)vs(1.86±0.21),P0.01]。同時(shí)也導(dǎo)致成骨分化標(biāo)志物Runx2的蛋白表達(dá)下調(diào)。結(jié)論利用慢病毒介導(dǎo)的干擾病毒載體成功干擾了PDLSCs SMO基因的表達(dá),SMO基因的下調(diào)會(huì)導(dǎo)致PDLSCs增殖減慢,成骨分化能力減弱。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院口腔科;四川省軍區(qū)門診部口腔科;德陽(yáng)市第二人民醫(yī)院口腔科;武警重慶總隊(duì)機(jī)關(guān)門診部口腔科;重慶大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： Smoothened RNA干擾 慢病毒 人牙周膜干細(xì)胞
【分類號(hào)】：R322.41
【正文快照】： 人牙周膜干細(xì)胞(human periodontal ligament stemcells,PDLSCs)是正畸牙移動(dòng)過程中骨改建過程的關(guān)鍵細(xì)胞,如何調(diào)控其增殖與分化目前已成為口腔界研究的重點(diǎn)。分泌型信號(hào)分子Hedgehog(Hh)家族在哺乳動(dòng)物多器官的正常發(fā)育過程中起關(guān)鍵作用,考慮到現(xiàn)階段國(guó)內(nèi)外研究中該信號(hào)通路

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本文編號(hào)：580020