發(fā)布時間：2017-07-27 03:23

  本文關鍵詞：攜帶人金屬蛋白酶組織抑制劑1重組腺病毒的構建及在人臍靜脈內(nèi)皮細胞中的表達

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【摘要】：目的構建攜帶人金屬蛋白酶組織抑制劑1(TIMP1)的重組腺病毒AdV-hTIMP1,感染體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞CRL-1730,觀察其mRNA表達情況。方法應用AdEasy復制缺陷型腺病毒載體系統(tǒng)在大腸埃希菌BJ5183中通過同源重組構建Ad-hTIMP1和對照Ad-Track。陽離子脂質(zhì)體法將重組腺病毒轉染到人胚胎腎細胞(HEK293T)中進行包裝和擴增。純化后PCR鑒定hTIMP1目的基因,OD260法測定滴度,透射電鏡觀察腺病毒形態(tài)。將人臍靜脈內(nèi)皮細胞CRL-1730分為3組,空白對照組、Track對照組和TIMP1實驗組,感染48h后收集細胞,半定量PCR(RT-PCR)法檢測內(nèi)皮細胞中TIMP1mRNA的表達情況。結果重組腺病毒Ad-hTIMP1的滴度為1.9×1012v.p/mL。其感染人臍靜脈內(nèi)皮細胞CRL-1730后,實驗組TIMP1mR-NA的表達明顯升高(P0.05)。結論成功構建了攜帶hTIMP1基因的重組腺病毒Ad-hTIMP1,成功感染了體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞CRL-1730,使細胞中hTIMP1過表達,為心血管疾病的基因治療提供平臺。
【作者單位】： 天津醫(yī)科大學;天津市胸科醫(yī)院;
【關鍵詞】： 腺病毒 人 金屬蛋白酶組織抑制劑 基因治療
【基金】：天津市自然科學基金資助項目(033609911)
【分類號】：R329
【正文快照】： 基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)是降解細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)成分的主要酶系[1],金屬蛋白酶組織抑制劑(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMPs)是MMPs的內(nèi)源性特異性抑制劑[2]。近年研究發(fā)現(xiàn),MMPs/TIMPs的比例失衡與動脈粥樣硬化、冠

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