發(fā)布時間：2017-07-26 03:17

  本文關(guān)鍵詞：基于hNIS基因的輻射正反饋重組桿狀病毒體系制備

  更多相關(guān)文章： 人鈉碘同向轉(zhuǎn)運體 早期生長應答因子 重組桿狀病毒 正反饋

【摘要】：目的構(gòu)建含早期生長應答因子1(Egr1)輻射敏感啟動子調(diào)控的人鈉碘同向轉(zhuǎn)運體(hNIS)基因重組桿狀病毒,為進一步延長核素在細胞中的滯留時間,提高hNIS介導的惡性腫瘤放射性核素基因靶向治療療效提供理論基礎。方法空載體pFB取自質(zhì)粒pFB-CMV-EGFP,Egr1啟動子取自質(zhì)粒PGL3-Egr1-luc,hNIS取自質(zhì)粒pcDNA3.1-CMV-hNIS,構(gòu)建重組桿狀病毒載體質(zhì)粒pFB-Egr1-Hnis;同時構(gòu)建含CMV啟動子的質(zhì)粒pFB-CMV-hNIS作為陽性對照,并將桿狀病毒空載體質(zhì)粒pFB-0作為陰性對照。隨后制備各組桿狀病毒,擴增收集重組桿狀病毒并進行滴度測定。為進一步鑒定病毒功能,一方面通過體外感染U87腦膠質(zhì)瘤細胞并采用131I刺激,通過免疫熒光檢測131I刺激后的hNIS蛋白表達;另一方面通過攝碘實驗進一步驗證所表達的hNIS蛋白的攝碘功能和特性。結(jié)果成功構(gòu)建重組桿狀病毒載體質(zhì)粒pFB-Egr1-hNIS和pFB-CMV-hNIS;轉(zhuǎn)座成功并提取了重組Bacmid;重組Bacmid轉(zhuǎn)染Sf 9細胞后擴增收集的重組桿狀病毒滴度可以達到1×1010pfu/mL。體外感染U87細胞后,免疫熒光檢測表明131I刺激后可增加hNIS的表達,感染細胞表達的hNIS蛋白位于細胞膜上,且具有攝碘的功能。結(jié)論成功構(gòu)建了重組桿狀病毒載體質(zhì)粒pFB-Egr1-hNIS及pFB-CMV-hNIS,獲得高滴度的重組桿狀病毒Bac-Egr1-hNIS、Bac-CMV-hNIS和Bac-0并得到驗證;建立了基于hNIS基因的輻射正反饋重組桿狀病毒體系,為進一步提高核素靶向治療療效奠定了重要的理論基礎。
【作者單位】： 上海交通大學醫(yī)學院附屬瑞金醫(yī)院核醫(yī)學科;
【關(guān)鍵詞】： 人鈉碘同向轉(zhuǎn)運體 早期生長應答因子 重組桿狀病毒 正反饋
【基金】：國家自然科學基金(81101071) 上海市優(yōu)秀學科帶頭人計劃項目(11XD1403700) 上海高校青年教師培養(yǎng)資助計劃(2011)~~
【分類號】：R373
【正文快照】： 人鈉碘同向轉(zhuǎn)運體(human sodium/iodide sym-porter,hNIS)具有主動轉(zhuǎn)運多種放射性核素的功能,通過在腫瘤細胞中誘導hNIS的表達或?qū)NIS基因特異性轉(zhuǎn)染到腫瘤細胞中,已經(jīng)成為放射性核素如131I治療腫瘤的一條比較常規(guī)的方法。但NIS介導的腫瘤治療常常會發(fā)生核素滯留時間過短,因

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張新;李亞明;;鈉碘轉(zhuǎn)運體的研究進展及其在腫瘤顯像和治療中的應用[J];腫瘤學雜志;2008年08期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王榮福;;腫瘤核醫(yī)學示蹤新技術(shù)[J];腫瘤學雜志;2008年08期

2 柴文文;胡碩;;NIS基因在惡性腫瘤中的研究進展[J];腫瘤學雜志;2013年12期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 林開敏;針對TGF-β1啟動子的ASODNs對新西蘭兔腹主動脈支架植入后再狹窄及再內(nèi)皮化的影響[D];福建醫(yī)科大學;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 柴文文;NIS介導耐藥型肺癌放射性核素顯像及治療的實驗研究[D];中南大學;2012年

2 劉曄;分化型甲狀腺癌術(shù)后~(131)I治療療效與影響因素分析[D];山西醫(yī)科大學;2013年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳振海;王琴;范學政;寧宜寶;王在時;夏春;;構(gòu)建表達豬瘟病毒E0基因的重組桿狀病毒[J];上海農(nóng)業(yè)學報;2006年01期

2 袁萍;閆麗輝;冉多良;劉培欣;聞曉波;曹殿軍;;新城疫病毒F_(48)E_9株和La Sota株F基因在Bac-to-Bac昆蟲桿狀病毒系統(tǒng)中的表達[J];新疆農(nóng)業(yè)大學學報;2006年02期

3 袁建琴;高斌戰(zhàn);宋寶敏;;H9N2型禽流感病毒HA基因在昆蟲/桿狀病毒系統(tǒng)中的表達[J];山西農(nóng)業(yè)大學學報(自然科學版);2007年01期

4 張小麗;盧曾軍;田美娜;孫普;曹軼梅;付元芳;馬小軍;劉在新;謝慶閣;;口蹄疫病毒2C′3AB基因重組桿狀病毒的構(gòu)建及其表達[J];中國獸醫(yī)科學;2008年06期

5 田飛鵬;曹軼梅;盧曾軍;孫普;高云英;劉在新;;共表達O型口蹄疫病毒P12A+3C基因的重組桿狀病毒的構(gòu)建[J];華北農(nóng)學報;2010年01期

6 邢福珊;許信剛;童德文;王志f;張彥明;;豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白在桿狀病毒表面的展示[J];中國獸醫(yī)雜志;2010年12期

7 李迎曉;秦愛建;劉紅梅;邵紅霞;金文杰;劉岳龍;;雞傳染性腔上囊病病毒VP2基因在昆蟲細胞中的表達[J];中國獸醫(yī)科學;2005年12期

8 孟慶文;劉光亮;于康震;童光志;劉娣;施建忠;陳化蘭;;H5亞型禽流感病毒HA基因昆蟲／桿狀病毒系統(tǒng)的表達及對BALB/c小鼠的免疫保護[J];科技導報;2006年03期

9 魏蘭蘭,韓立群,谷鴻喜,凌秋;人乳頭瘤病毒16型晚期蛋白在昆蟲細胞中的表達[J];中國公共衛(wèi)生;2002年06期

10 高玉偉;夏咸柱;侯小強;鞠會艷;王承宇;王鐵成;黃耕;鄒嘯環(huán);;虎源流感病毒HA基因的系統(tǒng)發(fā)生分析及其在桿狀病毒系統(tǒng)中的表達[J];獸類學報;2006年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃鋒濤;崔曉嫻;曹勝波;熊傳喜;王敏;王衛(wèi)民;吳兵;劉學芹;;重組桿狀病毒高效轉(zhuǎn)導魚類細胞[A];2010年中國水產(chǎn)學會學術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

2 朱碧波;徐敏;葉靜;蔣蓉;楊曉紅;傅振芳;陳煥春;曹勝波;;表達西尼羅河病毒prM/E蛋白的重組桿狀病毒的構(gòu)建及其免疫原性分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學分會第三次學術(shù)研討會論文集[C];2012年

3 趙春文;肖定華;王嘉璽;;利用重組桿狀病毒在昆蟲細胞SF-9中表達人白介素-6[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

4 劉濤;張耀洲;;人乳鐵蛋白cDNA的克隆及在家蠶細胞中的表達[A];首屆長三角科技論壇——長三角生物醫(yī)藥發(fā)展論壇論文集[C];2004年

5 魏蘭蘭;谷鴻喜;;16型人乳頭瘤病毒衣殼蛋白在真核細胞中的表達[A];慶祝黑龍江省免疫學會成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

6 馬玲;邵帥;潘漢世;陳鳳蓮;黃紅梅;吳健敏;;抗CD22人源基因工程多價微型抗體在重組桿狀病毒中的表達及純化[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

7 廖俊偉;尹秀鳳;劉大偉;毛火云;胡來根;張小飛;;Ⅰ型鴨肝炎病毒VP1基因在昆蟲細胞中的表達[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第七屆全國會員代表大會暨第十三次學術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2009年

8 趙樸;李海燕;楊煥良;陳化蘭;于康震;盧中華;;豬流感病毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01分離株神經(jīng)氨酸酶基因的克隆及真核表達[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

9 王芳;胡波;任雪楓;范志宇;楊龍圣;徐為中;張則斌;何孔旺;;兔出血癥病毒衣殼蛋白在昆蟲細胞中的表達及對家兔的免疫保護效果[A];中國畜牧獸醫(yī)學會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學分會暨中國免疫學會獸醫(yī)免疫分會第七次研討會論文集[C];2008年

10 鄭水蓮;錢鳴蓉;李新;陳樞青;曾蘇;;利用細菌/桿狀病毒在系統(tǒng)昆蟲細胞中表達人類UGT1A6[A];首屆長三角科技論壇——長三角生物醫(yī)藥發(fā)展論壇論文集[C];2004年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉濤;家蠶生物反應器表達人乳鐵蛋白及其功能研究[D];浙江大學;2005年

2 潘永飛;重組桿狀病毒作為一種新型的基因治療載體的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2009年

3 仇華吉;豬繁殖與呼吸綜合征病毒CH-la株基因組解析及其囊膜蛋白結(jié)構(gòu)與功能分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2001年

4 張明策;人乳頭瘤病毒11型L1基因的克隆、表達與表達產(chǎn)物的免疫學分析[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2001年

5 王淼;人乳頭瘤病毒6型衣殼蛋白L1和L2基因的克隆、表達及病毒樣顆粒的裝配與免疫學分析[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2002年

6 張紹杰;表達傳染性喉氣管炎病毒gB基因重組雞痘病毒的構(gòu)建及其免疫效力的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2000年

7 金紅;牛流行熱病毒外膜糖蛋白G基因在重組病毒中的表達研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2000年

8 曹軼梅;Asia 1型口蹄疫病毒空衣殼在昆蟲細胞中的組裝及其免疫原性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2009年

9 葛晶;昆蟲桿狀病毒AcMNPV ORF38的功能研究及特異性轉(zhuǎn)導B淋巴細胞的重組桿狀病毒的構(gòu)建[D];復旦大學;2007年

10 楊仁全;SARS病人組織中SARS冠狀病毒全基因組克隆、序列分析及病毒樣顆粒裝配[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2005年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃春旭;雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白在桿狀病毒表面的展示及其免疫原性研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2010年

2 倪佳;表達水貂腸炎病毒VP2蛋白的重組桿狀病毒的構(gòu)建及其免疫原性分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2011年

3 徐敏;西尼羅河病毒重組桿狀病毒和重組慢病毒的構(gòu)建[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2010年

4 陳奇;兩株狂犬病病毒糖蛋白的桿狀病毒表達及其免疫原性研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2013年

5 田飛鵬;桿狀病毒介導O型口蹄疫病毒P12A和3C基因在Sf9細胞和BHK細胞中的共表達[D];西北農(nóng)林科技大學;2010年

6 王煜;不同啟動子在昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)中的活性研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2008年

7 郝婧;禽流感病毒H7亞型HA優(yōu)化基因的表達[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2006年

8 高輝;含對蝦白斑綜合癥病毒ie1啟動子的重組桿狀病毒介導的哺乳動物細胞基因轉(zhuǎn)移[D];新疆農(nóng)業(yè)大學;2007年

9 藏玉婷;鵝副粘病毒HN及F基因在昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)的表達[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2007年

10 姜秀英;His-豬生長激素融合基因在大腸桿菌與桿狀病毒表達體系中的表達與純化[D];蘇州大學;2005年

，

本文編號：574535