發(fā)布時(shí)間：2017-07-26 03:17

  本文關(guān)鍵詞：基于hNIS基因的輻射正反饋重組桿狀病毒體系制備

  更多相關(guān)文章： 人鈉碘同向轉(zhuǎn)運(yùn)體 早期生長(zhǎng)應(yīng)答因子 重組桿狀病毒 正反饋

【摘要】：目的構(gòu)建含早期生長(zhǎng)應(yīng)答因子1(Egr1)輻射敏感啟動(dòng)子調(diào)控的人鈉碘同向轉(zhuǎn)運(yùn)體(hNIS)基因重組桿狀病毒,為進(jìn)一步延長(zhǎng)核素在細(xì)胞中的滯留時(shí)間,提高h(yuǎn)NIS介導(dǎo)的惡性腫瘤放射性核素基因靶向治療療效提供理論基礎(chǔ)。方法空載體pFB取自質(zhì)粒pFB-CMV-EGFP,Egr1啟動(dòng)子取自質(zhì)粒PGL3-Egr1-luc,hNIS取自質(zhì)粒pcDNA3.1-CMV-hNIS,構(gòu)建重組桿狀病毒載體質(zhì)粒pFB-Egr1-Hnis;同時(shí)構(gòu)建含CMV啟動(dòng)子的質(zhì)粒pFB-CMV-hNIS作為陽(yáng)性對(duì)照,并將桿狀病毒空載體質(zhì)粒pFB-0作為陰性對(duì)照。隨后制備各組桿狀病毒,擴(kuò)增收集重組桿狀病毒并進(jìn)行滴度測(cè)定。為進(jìn)一步鑒定病毒功能,一方面通過(guò)體外感染U87腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞并采用131I刺激,通過(guò)免疫熒光檢測(cè)131I刺激后的hNIS蛋白表達(dá);另一方面通過(guò)攝碘實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證所表達(dá)的hNIS蛋白的攝碘功能和特性。結(jié)果成功構(gòu)建重組桿狀病毒載體質(zhì)粒pFB-Egr1-hNIS和pFB-CMV-hNIS;轉(zhuǎn)座成功并提取了重組Bacmid;重組Bacmid轉(zhuǎn)染Sf 9細(xì)胞后擴(kuò)增收集的重組桿狀病毒滴度可以達(dá)到1×1010pfu/mL。體外感染U87細(xì)胞后,免疫熒光檢測(cè)表明131I刺激后可增加hNIS的表達(dá),感染細(xì)胞表達(dá)的hNIS蛋白位于細(xì)胞膜上,且具有攝碘的功能。結(jié)論成功構(gòu)建了重組桿狀病毒載體質(zhì)粒pFB-Egr1-hNIS及pFB-CMV-hNIS,獲得高滴度的重組桿狀病毒Bac-Egr1-hNIS、Bac-CMV-hNIS和Bac-0并得到驗(yàn)證;建立了基于hNIS基因的輻射正反饋重組桿狀病毒體系,為進(jìn)一步提高核素靶向治療療效奠定了重要的理論基礎(chǔ)。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科;
【關(guān)鍵詞】： 人鈉碘同向轉(zhuǎn)運(yùn)體 早期生長(zhǎng)應(yīng)答因子 重組桿狀病毒 正反饋
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81101071) 上海市優(yōu)秀學(xué)科帶頭人計(jì)劃項(xiàng)目(11XD1403700) 上海高校青年教師培養(yǎng)資助計(jì)劃(2011)~~
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 人鈉碘同向轉(zhuǎn)運(yùn)體(human sodium/iodide sym-porter,hNIS)具有主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)多種放射性核素的功能,通過(guò)在腫瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)hNIS的表達(dá)或?qū)NIS基因特異性轉(zhuǎn)染到腫瘤細(xì)胞中,已經(jīng)成為放射性核素如131I治療腫瘤的一條比較常規(guī)的方法。但NIS介導(dǎo)的腫瘤治療常常會(huì)發(fā)生核素滯留時(shí)間過(guò)短,因

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