本文關(guān)鍵詞：磷酸酶STEP的Q-loop中T541參與催化反應(yīng)的機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶 紋狀體蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶 紋狀體 中樞神經(jīng)系統(tǒng) 蛋白磷酸化

【摘要】：目的研究紋狀體蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶(STEP)pY-loop結(jié)構(gòu)上第330位的蘇氨酸(T330)和Q-loop結(jié)構(gòu)上第541位的蘇氨酸(T541)參與催化反應(yīng)的作用機(jī)制。方法構(gòu)建STEP野生型(STEP-WT)及其突變體(STEPT330D/T541A)的表達(dá)質(zhì)粒;表達(dá)并純化STEP-WT及其突變體蛋白,體外檢測這些蛋白對(duì)小分子底物4-硝基苯磷酸二鈉(pNPP)的催化活力,分析NaVO3對(duì)STEP-WT及其突變體酶活性的抑制作用;檢測STEP-WT及其突變體催化反應(yīng)的pH依賴性和對(duì)解離基團(tuán)pK a的依賴性。結(jié)果體外催化pNPP水解的過程中,STEP-T330D的催化性質(zhì)較STEP-WT無明顯變化,STEP-T541A的K m略有增加,k cat下降至STEP-WT的1/3以下。NaVO3對(duì)于STEP-WT及其突變體的抑制常數(shù)K i無明顯變化。在STEP的pH依賴性研究中,STEP-T541A的pK2app顯著增加且它的(k cat)lim下降至野生型1/10以下。在STEP催化底物反應(yīng)過程對(duì)底物解離基團(tuán)pK a依賴性的研究中,STEP-T541A的β1g(k cat)較STEP-WT明顯增大。結(jié)論 T541參與了STEP催化反應(yīng)中從產(chǎn)物生成到磷酸根釋放這一過程,靶向STEP治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物可以考慮通過與T541相互作用進(jìn)行設(shè)計(jì)。
【作者單位】： 山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院神經(jīng)外科;山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究所;山東大學(xué)威海分校;
【關(guān)鍵詞】： 蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶 紋狀體蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶 紋狀體 中樞神經(jīng)系統(tǒng) 蛋白磷酸化
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81171062;31271505);國家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(31100580) 山東大學(xué)自主創(chuàng)新基金(2012TS114)
【分類號(hào)】：R341
【正文快照】： 蛋白質(zhì)的酪氨酸磷酸化修飾是多細(xì)胞生物中目前已知的最重要的轉(zhuǎn)錄后修飾之一,調(diào)節(jié)許多重要的生理過程,如細(xì)胞的新陳代謝、組織的分化和生長、基因的轉(zhuǎn)錄與調(diào)控、神經(jīng)可塑性和免疫應(yīng)答等[1-2]。在人體內(nèi),蛋白質(zhì)酪氨酸激酶(protein tyro-sine kinase,PTK)將磷酸基團(tuán)共價(jià)轉(zhuǎn)移到

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本文編號(hào)：545056