本文關(guān)鍵詞：血管內(nèi)皮前體細(xì)胞對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞分化潛能的影響

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【摘要】：目的1.探討血管內(nèi)皮前體細(xì)胞(EPC)對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)成骨分化的影響以及機(jī)制。2.探討EPC對(duì)MSC成軟骨分化的影響。方法1.利用全骨髓貼壁法從C57BL/6小鼠骨髓內(nèi)分離MSC,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)第三代細(xì)胞表面分子表達(dá)情況;成骨、成軟骨誘導(dǎo)檢測(cè)其分化能力。2.利用差速貼壁法分離EPC,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)第三代細(xì)胞表面分子,進(jìn)一步采用體外管腔結(jié)構(gòu)形成實(shí)驗(yàn)對(duì)其功能進(jìn)行鑒定。3.茜素紅染色檢測(cè)MSC/EPC共培養(yǎng)、不同濃度的血管內(nèi)皮前體細(xì)胞條件培養(yǎng)基下(EPC-CM)對(duì)MSC成骨分化的影響。4.提取血管內(nèi)皮前體細(xì)胞的條件培養(yǎng)基并用ELISA檢測(cè)VEGF、TGFβ1、PDGF、IGF-1、SDF-1、b FGF的含量。5.在50%EPC-CM基礎(chǔ)上,分別加入上述6個(gè)細(xì)胞因子的中和抗體,茜素紅染色檢測(cè)EPC-CM中參與促進(jìn)間充質(zhì)細(xì)胞成骨分化的細(xì)胞因子。6.阿利辛藍(lán)染色檢測(cè)MSC/EPC共培養(yǎng)、不同濃度的EPC-CM對(duì)MSC成軟骨分化的影響。結(jié)果1.體外分離培養(yǎng)的MSC表達(dá)間充質(zhì)細(xì)胞表面標(biāo)記物,幾乎不表達(dá)造血系細(xì)胞的標(biāo)志物,具備成骨、成軟骨分化能力。2.利用差速貼壁法所得的血管內(nèi)皮前體細(xì)胞同時(shí)表達(dá)造血細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記物,并且能在基質(zhì)膠上形成管腔樣結(jié)構(gòu)。3.MSC/EPC組礦化結(jié)節(jié)形成明顯多于MSC組,鈣鹽半定量檢測(cè)示MSC/EPC組OD值大于MSC組OD值,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析P0.001;50%EPC-CM組礦化結(jié)節(jié)形成多于25%EPC-CM組,25%EPC-CM組多于0%EPC-CM組;半定量分析50%EPC-CM組OD值大于25%EPC-CM組OD值(P0.01),25%EPC-CM組OD值大于0%EPC-CM組OD值(P0.01)。4.EPC分泌VEGF、TGFβ1、PDGF、IGF-1、SDF-1、b FGF。5.在50%EPC-CM下,加入VEGF、TGFβ1、IGF-1抗體的三組礦化鈣結(jié)節(jié)數(shù)量相對(duì)于對(duì)照組明顯減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。6.MSC/EPC組的糖胺聚糖沉積量明顯多于MSC組(P0.001);糖胺聚糖沉積量在50%EPC-CM組、25%EPC-CM組、0%EPC-CM組無(wú)差異(P0.05)。結(jié)論1.血管內(nèi)皮前體細(xì)胞或許是通過(guò)其分泌的VEGF、TGFβ1、IGF-1促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化。2.在體外血管內(nèi)皮前體細(xì)胞通過(guò)直接接觸促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 血管內(nèi)皮前體細(xì)胞 共培養(yǎng) 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 胰島素樣生長(zhǎng)因子1 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子1
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 縮略語(yǔ)表11-12
• 前言12-14
• 第一部分：C57BL/6 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、血管內(nèi)皮前體細(xì)胞的分離、擴(kuò)增與鑒定14-24
• 實(shí)驗(yàn)一：C57BL/6 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、擴(kuò)增與鑒定14-19
• 1 材料14-15
• 1.1 主要儀器和試劑14-15
• 1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 1.3 主要溶液的配置15
• 2 方法15-16
• 2.1 小鼠MSC的分離與培養(yǎng)15-16
• 2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠MSC表面標(biāo)記物16
• 2.3 小鼠MSC成骨分化鑒定16
• 2.4 小鼠MSC成軟骨分化鑒定16
• 3 結(jié)果16-18
• 3.1 MSC的形態(tài)學(xué)特征16-17
• 3.2 MSC的免疫表型17
• 3.3 MSC的成骨、成軟骨分化17-18
• 4 討論18-19
• 實(shí)驗(yàn)二：C57BL/6 小鼠血管內(nèi)皮前體細(xì)胞的分離、擴(kuò)增與鑒定19-24
• 1 材料19-20
• 1.1 主要儀器和試劑19-20
• 1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物20
• 2 方法20-21
• 2.1 C57BL/6 小鼠血管內(nèi)皮前體細(xì)胞的分離與培養(yǎng)20
• 2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)EPC表面標(biāo)記物20
• 2.3 管腔結(jié)構(gòu)形成試驗(yàn)20-21
• 3 結(jié)果21-22
• 3.1 血管內(nèi)皮前體細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征21
• 3.2 第三代血管內(nèi)皮前體細(xì)胞的表型特征21-22
• 3.3 第三代血管內(nèi)皮前體細(xì)胞在基質(zhì)膠上形成管腔結(jié)構(gòu)22
• 4 討論22-24
• 第二部分：血管內(nèi)皮前體細(xì)胞對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響24-37
• 1 材料24-25
• 1.1 主要儀器和試劑24
• 1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物24
• 1.3 主要溶液的配置24-25
• 2 方法25-29
• 2.1 C57BL/6 小鼠MSC、EPC的分離、培養(yǎng)與鑒定25
• 2.2 EPC/MSC共培養(yǎng)對(duì)MSC成骨分化的影響25
• 2.3 EPC條件性培養(yǎng)基（EPC-CM）的提取25
• 2.4 EPC-CM對(duì)MSC成骨分化的影響25
• 2.5 ELISA法檢測(cè)EPC-CM中VEGF、TGFβ1、PDGF、IGF-1、SDF-1、b FGF含量25-29
• 2.6 探索EPC-CM中促進(jìn)MSC成骨分化的細(xì)胞因子29
• 2.7 檢測(cè)MSC表面表達(dá)VRGFR2情況29
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法29
• 3 結(jié)果29-35
• 3.1 MSC/EPC共培養(yǎng)促進(jìn)MSC成骨分化29-30
• 3.2 EPC-CM促進(jìn)MSC成骨分化30-31
• 3.3 EPC分泌VEGF、TGFβ1、PDGF、IGF-1、SDF-1、b FGF31-32
• 3.4 VEGF、TGFβ1、IGF-1 參與EPC促進(jìn)MSC成骨分化32-34
• 3.5 MSC表達(dá)VEGFR234-35
• 4 討論35-37
• 第三部分：血管內(nèi)皮前體細(xì)胞對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的影響37-42
• 1 材料37
• 1.1 主要儀器和試劑37
• 1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物37
• 1.3 主要溶液的配置37
• 2 方法37-38
• 2.1 C57BL/6 小鼠MSCs、EPCs的分離、培養(yǎng)與鑒定37
• 2.2 EPCs/MSCs共培養(yǎng)對(duì)MSCs成軟骨分化的影響37
• 2.3 EPC條件性培養(yǎng)基（EPC-CM）的提取37-38
• 2.4 EPC-CM對(duì)MSC成骨分化的影響38
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法38
• 3 結(jié)果38-40
• 3.1 MSC/EPC共培養(yǎng)促進(jìn)MSC成軟骨分化38-39
• 3.2 EPC-CM對(duì)MSC成軟骨分化無(wú)影響39-40
• 4 討論40-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-49
• 文獻(xiàn)綜述49-57
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 致謝57-58
• 作者簡(jiǎn)介58-59
• 導(dǎo)師評(píng)閱表59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 俞猛;徐萬(wàn)鵬;于方;付勝良;;TGF-β_1和bFGF對(duì)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖、分化的影響[J];中國(guó)骨腫瘤骨病;2006年06期

2 Janet L. Crane;Luo Zhao;Joseph S. Frye;Lingling Xian;Tao Qiu;Xu Cao;;IGF-1 Signaling is Essential for Differentiation of Mesenchymal Stem Cells for Peak Bone Mass[J];Bone Research;2013年02期

3 劉丹平,宋耀濱,關(guān)振家,胡蘊(yùn)玉;體外培養(yǎng)bFGF,PDGF,TGF-β對(duì)兔MSC的ALP活性和增殖的影響[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年01期

4 江華;肖增明;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在骨科疾病修復(fù)中的應(yīng)用[J];中國(guó)臨床康復(fù);2006年45期

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本文編號(hào)：543512