本文關(guān)鍵詞：構(gòu)建人三葉因子3腺病毒載體對膽管上皮細胞遷移的調(diào)控作用

  更多相關(guān)文章： TFF基因 腺病毒載體 重組 損傷修復 細胞遷移

【摘要】：目的構(gòu)建含有人三葉因子3(trefoil factor family 3,TFF3)基因的腺病毒載體,并觀察其對膽管上皮細胞遷移的調(diào)控作用。方法利用PCR技術(shù)對目的基因TFF3全長進行擴增,測序后亞克隆至腺病毒穿梭質(zhì)粒構(gòu)建載體pAdTrack-CMV-TFF3,轉(zhuǎn)化至含腺病毒骨架質(zhì)粒pAd-Easy的大腸桿菌株BJ5183感受態(tài)細胞中進行同源重組,篩選重組子并經(jīng)內(nèi)切酶PacⅠ線性化,轉(zhuǎn)染293細胞進行病毒包裝及擴增,并進行滴度測定。構(gòu)建的TFF3腺病毒載體感染人膽管上皮細胞后用RT-PCR及Western blot檢測目的基因表達水平,并進行劃痕實驗觀察細胞遷移能力的變化。結(jié)果成功擴增了大小約為458 bp的人TFF3基因,測序報告顯示目的基因序列與NCBI報道一致;成功構(gòu)建了TFF3的同源重組腺病毒穿梭載體,經(jīng)293細胞包裝及擴增的病毒滴度為1.3×109CPU/mL。RT-PCR及Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染人膽管上皮細胞后其TFF3表達明顯增強,細胞遷移能力也明顯高于對照組。結(jié)論成功構(gòu)建含TFF3基因的腺病毒載體,為進一步研究TFF3在膽管上皮損傷修復中的作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院全軍肝膽外科研究所;
【關(guān)鍵詞】： TFF基因 腺病毒載體 重組 損傷修復 細胞遷移
【基金】：國家自然科學基金(30972948)~~
【分類號】：R363
【正文快照】： 三葉因子3(trefoil factor family 3,TFF3)屬三葉肽家族成員之一,其單聚體相對分子質(zhì)量為6.7×103。編碼人TFF3的基因位于21號染色體長臂21q22.3區(qū),其cDNA全長為222 bp,共編碼73個氨基酸,前14個為信號肽,后59個為成熟氨基酸。生理狀態(tài)下,TFF3主要高表達于大腸、小腸及胃竇黏

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王滎;王延洲;徐惠成;;deltex-1腺病毒載體的構(gòu)建及其在大鼠bMSCs中的表達[J];第三軍醫(yī)大學學報;2011年15期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王煥;吳修文;吳煒;張勇;萬千雪;金星;徐淑秀;彭曦;;不同途徑給予重組人腸三葉因子對燒傷后小鼠腸黏膜屏障功能的影響[J];重慶醫(yī)學;2012年15期

2 吳修文;王煥;吳煒;張勇;萬千雪;金星;徐淑秀;彭曦;;重組人腸三葉因子減輕燒傷后腸源性高代謝的實驗研究[J];重慶醫(yī)學;2012年15期

3 王臻;王林;萬千雪;金星;梁光萍;彭曦;;含hITF啟動子的熒光素酶報告質(zhì)粒的構(gòu)建及活性檢測[J];第三軍醫(yī)大學學報;2010年10期

4 張靜;吳靖芳;任君旭;王志勇;王浩宇;張耕;;大鼠胃潰瘍自愈期間三葉因子2的變化[J];第三軍醫(yī)大學學報;2011年13期

5 杜廷義;張勇;張云;;三葉因子:從實驗室研究到臨床醫(yī)學[J];動物學研究;2010年01期

6 鐘誠;姜振東;張學淵;;大鼠促紅細胞生成素重組腺病毒載體的構(gòu)建及其在大鼠SGNs中的表達[J];第三軍醫(yī)大學學報;2012年18期

7 余灝;張新;彭志紅;何勇虹;朱蓉;楊永濤;柏建鷹;陳文生;汪榮泉;;rTFF3、rIgGFcBp和rMuc2在大鼠腸道黏液層中的分布[J];解放軍醫(yī)學雜志;2010年03期

8 顧瑋;李健;張葉麗;孫穎;馬瑾;胡梅潔;;pS2/TFF1蛋白在胃癌及其癌前病變組織中表達的研究[J];胃腸病學;2010年12期

9 章美元;韓真;;腸三葉因子對腸黏膜保護與修復的研究[J];胃腸病學;2012年03期

10 許春娣;林凱;周同;;幽門螺桿菌感染及胃黏膜損傷免疫機制進展[J];細胞生物學雜志;2009年03期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 石磊;TFF2在胃癌中的表達及其與COX-2、VEGF和MVD的關(guān)系[D];廣西醫(yī)科大學;2011年

2 余灝;rTFF3、rIgGFcγBP、rMuc2在大鼠結(jié)腸不同黏液層中的分布及其相互作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2010年

3 方興剛;慢性乙型重型肝炎中醫(yī)證候分布及演變[D];浙江中醫(yī)藥大學;2012年

4 鄧榮;FF3在斷奶腹瀉仔豬腸道中的分布表達及對腸黏膜上皮細胞的作用[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2012年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Prevalence and risk factors of urinary incontinence in Fuzhou Chinese women[J];Chinese Medical Journal;2005年11期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐冬;魏楓;于津浦;付曉達;任秀寶;;sCD80-Linker-sCD40L融合基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及其在NIH3T3細胞的表達[J];天津醫(yī)科大學學報;2007年03期

2 夏萬堯;孫恒峗;陳瑾君;劉偉;周廣東;曹誼林;;HTGF-β1基因轉(zhuǎn)染脂肪干細胞及其表達[J];解剖科學進展;2011年02期

3 牟臨杰;丁鵬;王崇謙;王偉民;李宣鵬;王進昆;;基質(zhì)細胞衍生因子1趨化神經(jīng)干細胞遷移的體外效應[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年27期

4 明文玉,林學顏,銀巍,顧軍;人ureb1在大腸桿菌中高效表達及其抗體的制備[J];中國免疫學雜志;2001年05期

5 周鐵群,李德富;風疹病毒及其感染的診斷研究進展[J];微生物學免疫學進展;2001年02期

6 張成;柴建華;劉焯霖;梁秀齡;;Dystrophin基因第50和51號內(nèi)含子部分核苷酸順序分析[J];中華醫(yī)學遺傳學雜志;1993年05期

7 胡雪梅,張兆松,蘇川,吳�，|,季e鹲，

本文編號：533886