本文關(guān)鍵詞：MSCs與去分化MSCs在成骨分化過程中免疫原性上調(diào)的研究

  更多相關(guān)文章： 間充質(zhì)干細(xì)胞 去分化間充質(zhì)干細(xì)胞 成骨 免疫原性 miRNA

【摘要】：目的:比較間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)與去分化間充質(zhì)干細(xì)胞(De-differentiated mesenchymal stem cells,De-MSCs)的成骨分化潛能,并探究MSCs與De-MSCs在成骨分化過程中免疫原性的改變及其分子機(jī)制。方法:用酶消化法從人胎盤中分離得到MSCs,經(jīng)鑒定后,采用更換培養(yǎng)基的方法誘導(dǎo)得到De-MSCs,并對De-MSCs鑒定后用于實驗。(1)比較MSCs與De-MSCs的成骨分化潛能,用CCK8法檢測MSCs與De-MSCs成骨誘導(dǎo)7d過程中的增殖效率;MSCs與De-MSCs進(jìn)行成骨誘導(dǎo)7d后分別得到Ob-MSCs和Re-MSCs,實時熒光定量PCR(q-PCR,SYBR Green法)檢測成骨相關(guān)基因的表達(dá);ALP染色比較MSCs與De-MSCs成骨分化的效率。(2)采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測MSCs,Ob-MSCs,De-MSCs和Re-MSCs表面協(xié)同刺激分子的表達(dá)情況;并將4種細(xì)胞與T細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng),CCK8法檢測T細(xì)胞的增殖,檢測MSCs與De-MSCs在體外成骨分化過程中免疫原性的改變。(3)將絲裂霉素C處理的MSCs,Ob-MSCs,De-MSCs和Re-MSCs通過皮下植入免疫BALB/c小鼠,免疫5d后,眼眶靜脈取外周血,采用FCM檢測外周血單核細(xì)胞(PBMCs)中免疫細(xì)胞群的活化情況;免疫7d后,采用FCM檢測小鼠脾臟細(xì)胞中免疫細(xì)胞群的活化情況,檢測MSCs,Ob-MSCs,De-MSCs和Re-MSCs對小鼠的致敏情況。(4)實時定量PCR(q-PCR,Taqman探針法)檢測MSCs,Ob-MSCs,De-MSCs和Re-MSCs中與免疫(mi R-125b和mi R-296)和成骨(mi R-20a和mi R-29b)相關(guān)的micro RNA(mi RNA)的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)De-MSCs與MSCs具有相似的細(xì)胞形態(tài)、干細(xì)胞標(biāo)志與多向分化潛能。CCK8法檢測細(xì)胞增殖顯示出在成骨誘導(dǎo)7d的過程中,De-MSCs較MSCs有更高的增殖效率。q-PCR結(jié)果顯示Re-MSCs中成骨相關(guān)基因BMP2,COL1和Runx2的表達(dá)較Ob-MSCs明顯增高。ALP染色顯示De-MSCs較MSCs具有更強(qiáng)的成骨能力。(2)流式結(jié)果顯示,MSCs與De-MSCs體外成骨分化的過程中,正性共刺激分子的表達(dá)明顯增高,負(fù)性共刺激分子的表達(dá)明顯下降,且這種現(xiàn)象在De-MSCs中表現(xiàn)的更加明顯�；旌狭馨图�(xì)胞反應(yīng)(MLR)顯示,MSCs與De-MSCs可以抑制T細(xì)胞的增殖,但成骨分化后抑制T細(xì)胞增殖的程度降低,且Re-MSCs組T細(xì)胞的增殖效率高于Ob-MSCs組。(3)PBMCs的流式結(jié)果顯示,分化的Ob-MSCs和Re-MSCs致敏小鼠后,PBMCs中的T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和B細(xì)胞的活化效果均要高于相應(yīng)的未分化的MSCs和De-MSCs致敏的小鼠。同時,Re-MSCs致敏的效果高于Ob-MSCs組。以上現(xiàn)象在脾臟細(xì)胞的流式結(jié)果中體現(xiàn)的更加明顯。(4)mi R-20a和mi R-29b與成骨有關(guān),而mi R-125b與mi R-296與免疫調(diào)節(jié)有關(guān)。q-PCR結(jié)果顯示,mi R-20a和mi R-125b在MSCs與De-MSCs成骨分化的過程中表達(dá)下調(diào),而mi R-29b和mi R-296在成骨分化的過程中表達(dá)上調(diào),且mi RNAs在De-MSCs分化過程中表達(dá)下調(diào)與上調(diào)的幅度均明顯高于MSCs。結(jié)論:De-MSCs具有與MSCs相似的形態(tài)、干細(xì)胞標(biāo)志與多向分化潛能,且與MSCs相比具有更高的成骨分化潛能。MSCs與De-MSCs都具有低免疫原性,但是經(jīng)體外成骨分化后其免疫原性上調(diào),且De-MSCs上調(diào)的程度更高。MSCs與De-MSCs成骨分化過程中免疫原性的上調(diào)與mi RNA有關(guān)。提示De-MSCs可替代MSCs應(yīng)用于組織工程和再生醫(yī)學(xué),但需要考慮其在分化過程中免疫原性的改變對移植效果的影響。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 去分化間充質(zhì)干細(xì)胞 成骨 免疫原性 miRNA
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 致謝4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-12
• 引言12-17
• 參考文獻(xiàn)14-17
• 第一部分MSCs與De-MSCs的生物學(xué)特性及成骨潛能的比較17-31
• 1 材料與方法17-23
• 2 結(jié)果23-27
• 3 討論27-28
• 參考文獻(xiàn)28-31
• 第二部分MSCs與De-MSCs誘導(dǎo)成骨分化過程中免疫原性的變化31-42
• 1 材料與方法31-33
• 2 結(jié)果33-38
• 3 討論38-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 第三部分 與MSCs和De-MSCs的免疫和成骨相關(guān)的miRNA的研究42-48
• 1 材料與方法42-44
• 2 結(jié)果44-45
• 3 討論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-48
• 總結(jié)與展望48-49
• 綜述49-62
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 碩士研究生期間完成的論文62-63
• 課題資助63-64
• 中英文對照縮略詞表64

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Jie-fei Shen;Atsunori Sugawara;Joe Yamashita;Hideo Ogura;Soh Sato;;Dedifferentiated fat cells: an alternative source of adult multipotent cells from the adipose tissues[J];International Journal of Oral Science;2011年03期

，

本文編號：520339