本文關(guān)鍵詞：弓形蟲(chóng)CK1α缺失株感染小鼠毒力試驗(yàn)及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 弓形蟲(chóng) 酪蛋白激酶1α 毒力 信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子 棒狀體蛋白

【摘要】：弓形蟲(chóng),為頂復(fù)動(dòng)物門(mén)寄生原蟲(chóng),可感染人類和幾乎其他所有的溫血?jiǎng)游?常引起孕婦妊娠階段流產(chǎn),胎兒畸形、先天性缺陷或死胎等嚴(yán)重后果,免疫能力低下人群感染嚴(yán)重疾病。近幾年研究表明,弓形蟲(chóng)還會(huì)影響宿主的一些行為舉止,甚至與多種精神疾病有關(guān)。據(jù)國(guó)外報(bào)道,人感染弓形蟲(chóng)的平均感染率為25%~50%。而我國(guó)的人群感染率在0.1%~47.3%,豬感染率為4.78%~85.7%,牛的感染率為0.2%~43.4%。可見(jiàn)弓形蟲(chóng)病已經(jīng)嚴(yán)重影響了人類的健康生活和畜牧業(yè)的發(fā)展。蛋白激酶(Protein Kinase,PK)在弓形蟲(chóng)增殖、分化和感染過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。以往研究表明,鈣依賴蛋白激酶Ⅰ(CDPK1)在弓形蟲(chóng)胞吐中起著重要的調(diào)節(jié)作用;絲裂原活化蛋白激酶Ⅰ(MAPK1)通過(guò)誘導(dǎo)一氧化氮復(fù)合物(iNOS)合成抑制干擾素(IFN)合成,調(diào)節(jié)弓形蟲(chóng)的增殖;棒狀體蛋白激酶是一種弓形蟲(chóng)特有的蛋白激酶,參與調(diào)控弓形蟲(chóng)對(duì)宿主免疫反應(yīng)的影響。酪蛋白激酶(CK)是真核生物的一種保守的絲/蘇氨酸蛋白激酶,由Bnrnet在1954年在大鼠的肝臟中發(fā)現(xiàn)的,其功能是催化肽鏈中鄰近酸性氨基酸殘基的絲氨酸/蘇氨酸磷酸化。該蛋白激酶由Ⅰ型酪蛋白激酶(Casein Kinase 1,CK1)和Ⅱ型酪蛋白激酶(Casein Kinase 2,CK2)兩大家族蛋白組成。CK1參與調(diào)節(jié)多種重要的細(xì)胞過(guò)程,包括wnt信號(hào)通路、膜運(yùn)輸、細(xì)胞骨架的維護(hù)等。最近研究發(fā)現(xiàn)多種原核生物有CK1基因表達(dá),如弓形蟲(chóng)、瘧原蟲(chóng)、利氏曼原蟲(chóng)、錐蟲(chóng)等。此外,CK1抑制劑還可以抑制鞭毛蟲(chóng)和錐蟲(chóng)在血液中的增殖。CK1在機(jī)體多種生理活動(dòng)中發(fā)揮著舉足輕重的作用,如細(xì)胞分裂與凋亡、DNA修復(fù)、P53調(diào)控、周期性節(jié)律等。弓形蟲(chóng)基因組可以編碼CK1α和CK1β兩種CK1亞型,其中只有CK1α具有酶活性。CK1α是一種非第二信使依賴的激酶,以ATP作為單一磷酸供體,分布于細(xì)胞的細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)以及細(xì)胞核中。在哺乳動(dòng)物中,CK1α參與多種細(xì)胞生理活動(dòng),如細(xì)胞周期、染色體分離、膜轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡等。此外,CK1α參與Wnt/β-Cat、Hedgehog(Hh)及NF-κB等信號(hào)通路。弓形蟲(chóng)作為一種重要的模式生物和人獸共患病原,CK1α基因在其感染宿主過(guò)程中的作用還不清楚。研究目的:利用實(shí)驗(yàn)室已有的CK1α克隆缺失株(△ck1α)感染BALB/c小鼠,通過(guò)與野生株GT1對(duì)比,確定CK1α對(duì)弓形蟲(chóng)感染宿主毒力的影響。利用熒光定量PCR、elisa、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和westernblot等方法,推論出ck1α調(diào)節(jié)弓形蟲(chóng)毒力的具體機(jī)制。為預(yù)防弓形蟲(chóng)感染,研制疫苗和治療藥物提供一定的依據(jù)。研究?jī)?nèi)容:1、通過(guò)小鼠攻蟲(chóng)試驗(yàn),確定ck1α缺失對(duì)弓形蟲(chóng)毒力的影響;2、研究ck1α調(diào)節(jié)弓形蟲(chóng)毒力的具體機(jī)制。研究方法:1、確定ck1α對(duì)弓形蟲(chóng)毒力的影響90只6~8周齡balb/c雌性小鼠,采用隨機(jī)分組的方法分為9組,每組十只小鼠,每只小鼠腹腔接種200μl弓形蟲(chóng)速殖子稀釋液。第一組:每只小鼠接種102個(gè)gt1速殖子;第二組:每只小鼠接種103個(gè)gt1速殖子;第三組:每只小鼠接種104個(gè)gt1速殖子;第四組:每只小鼠接種102個(gè)△ck1α速殖子;第五組:每只小鼠接種103個(gè)△ck1α速殖子;第六組:每只小鼠接種104個(gè)△ck1α速殖子;第七組:每只小鼠接種102個(gè)ck1α回補(bǔ)株速殖子;第八組:每只小鼠接種103個(gè)ck1α回補(bǔ)株速殖子;第九組:每只小鼠接種104個(gè)ck1α回補(bǔ)株速殖子;根據(jù)小鼠死亡時(shí)間繪制生存曲線,分析ck1α缺失對(duì)于宿主生存時(shí)間的影響。在感染第3天和第7天處死感染小鼠,觀察小鼠肝組織損傷狀況,elisa檢測(cè)天冬門(mén)氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartateaminotransferase,ast)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alaninetransaminase,alt)含量,定量pcr(rt-pcr)檢測(cè)肝臟組織和脾臟組織荷蟲(chóng)量,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血清中il-12、ifn-γ等細(xì)胞因子含量,分析ck1α缺失對(duì)弓形蟲(chóng)毒力的影響。2、確定ck1α調(diào)節(jié)弓形蟲(chóng)毒力的機(jī)制取感染3天和7天小鼠的肝臟組織和脾臟組織,westernblot檢測(cè)肝臟組織和脾臟組織中mapk信號(hào)通路、nf-κb信號(hào)通路和stat信號(hào)通路活化情況,熒光定量pcr(rt-pcr)檢測(cè)肝臟組織和脾臟組織中il-12、ifn-γ等細(xì)胞因子含量,轉(zhuǎn)錄組測(cè)序檢測(cè)棒狀體蛋白轉(zhuǎn)錄水平變化。確定ck1α調(diào)節(jié)弓形蟲(chóng)毒力的具體機(jī)制。研究結(jié)果:1、ck1α缺失后,小鼠生存時(shí)間減短。第三組小鼠在腹腔注射5天后出現(xiàn)明顯的體外特征,在注射7-9天內(nèi)死亡,平均存活時(shí)間(mst)為7.7天。第一組和第二組小鼠在注射后10-13天死亡,mst分別為11.4天和10.4天。第六組小鼠在腹腔注射后4天出現(xiàn)明顯癥狀,在注射6-8天死亡,mst為6.8天。第四組和第五組在注射后8-12天死亡,mst分別為10.5天和8.4天。注射回補(bǔ)株組mst與等量注射gt1速殖子組mst無(wú)明顯差異(p0.05)。2、CK1α缺失后,弓形蟲(chóng)毒力增加。△ck1α感染小鼠,肝組織較GT1野生株出現(xiàn)明顯的病理性損傷;天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)含量相較于GT1感染小鼠均提高了4~6倍,而谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)含量提高了2~4倍;肝脾組織荷蟲(chóng)量均明顯高于GT1感染小鼠;△ck1α感染小鼠血清中IL-12和IFN-γ分泌量低于GT1感染小鼠。3、△ck1α通過(guò)ROP16活化STAT3抑制IL-12分泌,增加弓形蟲(chóng)毒力。△ck1α感染小鼠,肝脾組織中MAPK信號(hào)通路蛋白和NF-κB信號(hào)通路蛋白基本無(wú)明顯差異,只有肝組織內(nèi)MAPK p38磷酸化程度增加,這可能是導(dǎo)致肝組織嚴(yán)重?fù)p傷的原因。肝脾組織中STAT1/4蛋白磷酸化程度均低于GT1感染小鼠,STAT3/6明顯高于GT1,轉(zhuǎn)錄組測(cè)序檢測(cè)發(fā)現(xiàn)ROP16蛋白分泌量△ck1α感染小鼠明顯高于GT1。研究結(jié)論:1、△ck1α感染小鼠生存時(shí)間明顯減短,CK1α缺失后,弓形蟲(chóng)毒力顯著增強(qiáng);2、△ck1α通過(guò)分泌過(guò)量的ROP16蛋白活化STAT3來(lái)抑制IL-12的分泌,增強(qiáng)了弓形蟲(chóng)的毒力。
【關(guān)鍵詞】：弓形蟲(chóng) 酪蛋白激酶1α 毒力 信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子 棒狀體蛋白
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.7;R382.5
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-12
• 第一章 弓形蟲(chóng)CK1α缺失株感染小鼠毒力試驗(yàn)12-22
• 1.1 材料13-14
• 1.2 方法14-17
• 1.3 結(jié)果17-20
• 1.4 討論20
• 1.5 小結(jié)20-22
• 第二章 弓形蟲(chóng)CK1α缺失株毒力增強(qiáng)機(jī)制研究22-33
• 2.1 材料22-24
• 2.2 方法24-28
• 2.3 結(jié)果28-31
• 2.4 討論31-32
• 2.5 小結(jié)32-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介36-37
• 作者簡(jiǎn)介37-38
• 致謝38

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 茍?jiān)獎(jiǎng)?犬弓形蟲(chóng)病的診斷與防治[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2000年11期

2 李天營(yíng),肖鵬,肖猛;犬弓形蟲(chóng)病的診斷與治療[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2000年02期

3 洪雷;牛弓形蟲(chóng)病[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2000年04期

4 李天營(yíng),肖鵬;犬弓形蟲(chóng)病的診斷與治療[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2001年02期

5 艾小生;豬急性神經(jīng)型弓形蟲(chóng)病的診治[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2001年12期

6 徐慧中,胡銀云;某豬場(chǎng)暴發(fā)弓形蟲(chóng)病的診治[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2001年11期

7 陳敏;規(guī)模豬場(chǎng)暴發(fā)弓形蟲(chóng)病的報(bào)告[J];福建畜牧獸醫(yī);2002年05期

8 沈杰;我國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)界對(duì)弓形蟲(chóng)病認(rèn)識(shí)上的飛躍[J];中國(guó)獸醫(yī)寄生蟲(chóng)病;2004年02期

9 王紹琛;犬弓形蟲(chóng)病的診治[J];福建畜牧獸醫(yī);2004年05期

10 高昆賓;劉鳴雁;趙云燕;;一起肉牛弓形蟲(chóng)病的診治[J];養(yǎng)殖技術(shù)顧問(wèn);2006年07期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 朱引潔;吳文學(xué);賀國(guó)強(qiáng);;弓形蟲(chóng)病的診斷現(xiàn)狀[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2006年

2 李輝;張健;;一例犬弓形蟲(chóng)病的診斷與治療[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)小動(dòng)物醫(yī)學(xué)分會(huì)第四次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)外科學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（2）[C];2009年

3 李祥瑞;;弓形蟲(chóng)病的流行的新趨勢(shì)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)食品衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

4 崔平;秦建華;方素芳;;河北省動(dòng)物弓形蟲(chóng)病流行病學(xué)調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第五次代表大會(huì)暨第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

5 藺智兵;張厚雙;曹杰;周勇志;李國(guó)清;周金林;;弓形蟲(chóng)real-time PCR檢測(cè)方法的建立和初步應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第六次代表大會(huì)暨第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

6 楊娜;穆名楊;李紅魁;何建斌;;中國(guó)東北地區(qū)雞源弓形蟲(chóng)的流行病學(xué)調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

7 劉晶;蔡進(jìn)忠;于晉海;夏兆飛;林德貴;劉群;;幾種動(dòng)物弓形蟲(chóng)病血清流行病學(xué)的初步調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2006年

8 王權(quán);蔣蔚;荊振宇;陳永軍;楊康;宋寧寧;崔常勇;;五種中藥體外抗弓形蟲(chóng)抑制效果的研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第六次代表大會(huì)暨第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

9 鞏薇;衛(wèi)禮;王吉;賀爭(zhēng)鳴;邢瑞昌;;實(shí)驗(yàn)小鼠弓形蟲(chóng)檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[A];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

10 陳西岐;劉秀蘭;張克功;于德順;;貓弓形蟲(chóng)病的診治[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第五次代表大會(huì)暨第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 林曉麗;養(yǎng)貓者易感染弓形蟲(chóng)應(yīng)謹(jǐn)防患精神分裂癥[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2007年

2 小郭;弓形蟲(chóng)病危害不輕[N];中國(guó)商報(bào);2000年

3 戴培紅;北京友誼醫(yī)院探索治療弓形蟲(chóng)病的新途徑[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

4 本報(bào)記者 蔡玉冰 通訊員 黃賢君;弓形蟲(chóng)沒(méi)你想的可怕[N];廣東科技報(bào);2012年

5 李水源;當(dāng)前豬場(chǎng)弓形蟲(chóng)病的防控[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2013年

6 本報(bào)記者 白軼南;弓形蟲(chóng)病 危及胎兒健康[N];保健時(shí)報(bào);2005年

7 臨城縣畜牧局 李路民;豬得弓形蟲(chóng)病 吃了貓的虧[N];河北科技報(bào);2002年

8 北京友誼醫(yī)院北京熱帶醫(yī)學(xué)研究所研究員 甘紹伯 副主任醫(yī)師 馮曼玲;弓形蟲(chóng)——寵物的“寵物”[N];健康報(bào);2000年

9 連孝華;孕婦玩貓狗易危害胎兒[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2007年

10 王志海 邵芹;犬弓形蟲(chóng)病[N];中國(guó)畜牧報(bào);2003年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 呂剛;弓形蟲(chóng)表面抗原蛋白5的結(jié)構(gòu)分析及免疫學(xué)研究[D];山東大學(xué);2015年

2 龔國(guó)華;上海城區(qū)犬、貓弓形蟲(chóng)病流行病學(xué)調(diào)查及藥物治療的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 尹青;弓形蟲(chóng)Δbag1Δku80株的構(gòu)建及其作為貓弓形蟲(chóng)病疫苗候選株的免疫原性、安全性和效力的評(píng)價(jià)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 徐鵬;弓形蟲(chóng)新毒力基因TgMAPK1表達(dá)特性及其初步功能研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 張步彩;泰州地區(qū)豬弓形蟲(chóng)血清流行病學(xué)調(diào)查及中藥治療急性感染弓形蟲(chóng)小鼠效果的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

6 陳金鈴;CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞失能參與弓形蟲(chóng)分泌排泄抗原致小鼠早孕流產(chǎn)的機(jī)制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

7 楊鳴發(fā);弓形蟲(chóng)RH株脯氨酰氨氨基肽酶特征與功能性研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

8 張括;人—兔嵌合型抗弓形蟲(chóng)IgM抗體基因庫(kù)的構(gòu)建和抗弓形蟲(chóng)IgG抗體參考物質(zhì)的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

9 張偉超;TALEN和CRISPR技術(shù)在弓形蟲(chóng)致病機(jī)制研究中的應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

10 吳亮;弓形蟲(chóng)“遲發(fā)型死亡”機(jī)制的研究[D];江蘇大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊曉宇;重組弓形蟲(chóng)TRXL蛋白和EN02蛋白免疫保護(hù)力的評(píng)價(jià)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 王衛(wèi)艷;弓形蟲(chóng)SAG2、GRA6、GRA7基因的重組表達(dá)及應(yīng)用研究[D];濟(jì)南大學(xué);2015年

3 王成雙;弓形蟲(chóng)ROP46基因缺失蟲(chóng)株構(gòu)建及其生物學(xué)特性分析[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2016年

4 趙禹;弓形蟲(chóng)棒狀體頸部蛋白5和10基因的免疫保護(hù)作用及其基因缺失株的構(gòu)建[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 寇金華;豬弓形蟲(chóng)感染ELISA和膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)方法的建立與初步應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2016年

6 萬(wàn)俐娟;弓形蟲(chóng)毒力因子ROP18促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

7 古一;弓形蟲(chóng)CK1α缺失株感染小鼠毒力試驗(yàn)及機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

8 張曉川;苦參生物堿類成分抗弓形蟲(chóng)作用的研究[D];延邊大學(xué);2016年

9 王貝貝;弓形蟲(chóng)pET28a-SAG1和pET28a-SAG4重組基因的構(gòu)建、表達(dá)及其免疫保護(hù)作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

10 馬磊;弓形蟲(chóng)蛋白激酶MAPK1在宿主炎癥小體通路中的功能研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：517244