本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用哺乳動(dòng)物細(xì)胞表面抗體展示技術(shù)構(gòu)建登革病毒特異性全長人源抗體庫

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【摘要】：目的應(yīng)用哺乳動(dòng)物細(xì)胞表面抗體展示技術(shù)構(gòu)建登革病毒特異性全長人源抗體庫。方法采集登革確診患者恢復(fù)期外周血,分離外周血淋巴細(xì)胞并提取其總RNA,用RT-PCR擴(kuò)增全長Kappa輕鏈(LCκ)和重鏈可變區(qū)(VH)基因,構(gòu)建抗體輕鏈基因庫和抗體重鏈基因庫;將抗體基因庫轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞、用流式細(xì)胞儀分析抗體在CHO細(xì)胞表面的表達(dá)。結(jié)果以1.2μg總RNA為模板,用6套引物擴(kuò)增全長Kappa輕鏈和重鏈可變區(qū)基因,插入表達(dá)載體,輕鏈基因庫容量為1.45×104,重鏈基因庫容量為1.8×105;隨機(jī)挑選的10個(gè)輕鏈克隆和10個(gè)重鏈克隆,經(jīng)過測(cè)序鑒定,輕鏈有8個(gè)含有正確的閱讀框架,編碼8個(gè)不同的氨基酸序列,重鏈有7個(gè)含有正確的閱讀框架,編碼7個(gè)不同的氨基酸序列。流式細(xì)胞儀分析含有正確閱讀框架的單克隆和抗體基因庫,均檢測(cè)到全長抗體在CHO細(xì)胞表面的表達(dá),抗體庫中可表達(dá)的抗體多樣性達(dá)到109。結(jié)論以1.2μg總RNA為模板,通過RT-PCR擴(kuò)增,成功構(gòu)建可表達(dá)庫容量達(dá)到109的登革病毒特異性全長人抗體基因庫。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)院微生物學(xué)系;南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院;廣州市第八人民醫(yī)院感染科;南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院;杭州環(huán)捷科技有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 登革病毒 哺乳動(dòng)物細(xì)胞表面展示 全長人源抗體庫
【基金】：廣東省自然科學(xué)基金(S2011010003912) 南方醫(yī)科大學(xué)公衛(wèi)學(xué)院院長基金(GW201248) 杭州環(huán)捷科技有限公司科研基金
【分類號(hào)】：R392.1
【正文快照】： 登革病毒(DENV)屬于黃病毒科黃病毒屬,臨床上可引起登革熱(DF)、登革出血熱(DHF)和登革休克綜合征(DSS)[1]。由于全球氣候變暖、國際旅游頻繁和對(duì)蚊蟲缺乏有效的控制,全世界有25億人正受到感染登革病毒的威脅,是較為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。由于其發(fā)病機(jī)制至今尚未清楚并且缺乏

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