本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用哺乳動物細胞表面抗體展示技術(shù)構(gòu)建登革病毒特異性全長人源抗體庫

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【摘要】：目的應(yīng)用哺乳動物細胞表面抗體展示技術(shù)構(gòu)建登革病毒特異性全長人源抗體庫。方法采集登革確診患者恢復(fù)期外周血,分離外周血淋巴細胞并提取其總RNA,用RT-PCR擴增全長Kappa輕鏈(LCκ)和重鏈可變區(qū)(VH)基因,構(gòu)建抗體輕鏈基因庫和抗體重鏈基因庫;將抗體基因庫轉(zhuǎn)染CHO細胞、用流式細胞儀分析抗體在CHO細胞表面的表達。結(jié)果以1.2μg總RNA為模板,用6套引物擴增全長Kappa輕鏈和重鏈可變區(qū)基因,插入表達載體,輕鏈基因庫容量為1.45×104,重鏈基因庫容量為1.8×105;隨機挑選的10個輕鏈克隆和10個重鏈克隆,經(jīng)過測序鑒定,輕鏈有8個含有正確的閱讀框架,編碼8個不同的氨基酸序列,重鏈有7個含有正確的閱讀框架,編碼7個不同的氨基酸序列。流式細胞儀分析含有正確閱讀框架的單克隆和抗體基因庫,均檢測到全長抗體在CHO細胞表面的表達,抗體庫中可表達的抗體多樣性達到109。結(jié)論以1.2μg總RNA為模板,通過RT-PCR擴增,成功構(gòu)建可表達庫容量達到109的登革病毒特異性全長人抗體基因庫。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)院微生物學(xué)系;南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院;廣州市第八人民醫(yī)院感染科;南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院;杭州環(huán)捷科技有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 登革病毒 哺乳動物細胞表面展示 全長人源抗體庫
【基金】：廣東省自然科學(xué)基金(S2011010003912) 南方醫(yī)科大學(xué)公衛(wèi)學(xué)院院長基金(GW201248) 杭州環(huán)捷科技有限公司科研基金
【分類號】：R392.1
【正文快照】： 登革病毒(DENV)屬于黃病毒科黃病毒屬,臨床上可引起登革熱(DF)、登革出血熱(DHF)和登革休克綜合征(DSS)[1]。由于全球氣候變暖、國際旅游頻繁和對蚊蟲缺乏有效的控制,全世界有25億人正受到感染登革病毒的威脅,是較為嚴重的公共衛(wèi)生問題。由于其發(fā)病機制至今尚未清楚并且缺乏

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本文編號：517074