本文關(guān)鍵詞：蜱傳森林腦炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白1原核表達(dá)載體的構(gòu)建

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【摘要】：目的:構(gòu)建蜱傳森林腦炎病毒(TBEV)非結(jié)構(gòu)蛋白1(NS1)的原核表達(dá)載體,以期獲得其高純度的表達(dá),為制備多克隆抗體及其功能的研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)PCR引物,利用基因重組技術(shù)構(gòu)建原核表達(dá)載體pEASYTM-E1-NS1。將重組后質(zhì)粒pEASYTM-E1-NS1轉(zhuǎn)化至BL21細(xì)胞,經(jīng)異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)后進(jìn)行鎳離子親和純化,利用Bradford法測(cè)定蛋白濃度。采用SDS-PAGE和Western blotting法分析融合蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:含TBEV NS1的原核表達(dá)載體pEASYTM-E1-NS1經(jīng)誘導(dǎo)后,可獲得以包涵體形式存在的融合蛋白,通過(guò)親和純化得到較高純度的蛋白質(zhì)。SDS-PAGE和Western blotting,在相對(duì)分子質(zhì)量約40 000處有特異性蛋白條帶。結(jié)論:成功構(gòu)建重組pEASYTM-E1-NS1原核表達(dá)載體,獲得高純度的重組TBEV NS1的融合蛋白。
【作者單位】： 吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院;吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 蜱傳森林腦炎病毒 非結(jié)構(gòu)蛋白 原核表達(dá) 融合蛋白
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助課題(69301261)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 蜱傳森林腦炎病毒(Tick-borne encephalitisvirus,TBEV)是黃病毒科(Flaviviridae)黃病毒屬(Flavivirus)成員,TBEV引起的腦炎又稱森林腦炎,主要流行于歐洲和亞洲[1],在我國(guó)主要分布于東北地區(qū),在云南、新疆和西藏也有自然疫源地存在的報(bào)道[2]。人感染TBEV后可引起發(fā)熱、頭痛、

【相似文獻(xiàn)】

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