本文關(guān)鍵詞：脂多糖所致小鼠睪丸支持細(xì)胞GDNF表達(dá)減少對(duì)精原干細(xì)胞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的及意義睪丸炎(Orchitis)是男性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的非特異性感染,可影響精子的數(shù)量和質(zhì)量,嚴(yán)重者還可導(dǎo)致不育。脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)又稱內(nèi)毒素,是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要成分,也是感染發(fā)生時(shí)誘導(dǎo)睪丸細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng)的重要物質(zhì),腹腔注射LPS可建立大鼠睪丸炎模型。因此,探討LPS在睪丸炎所致不育中的作用機(jī)制,具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。 精原干細(xì)胞(Spermatogonial Stem cells,SSCs)位于睪丸生精小管基底膜上,是體內(nèi)自然狀態(tài)下唯一能將遺傳信息傳至子代的成體干細(xì)胞,它既能通過(guò)自我更新保持自身數(shù)量的穩(wěn)定,又能通過(guò)一系列的分化過(guò)程最終形成精子,SSCs自我更新和分化之間的平衡保證雄性生命過(guò)程中精子發(fā)生的持續(xù)進(jìn)行,一旦該平衡被打破則可能導(dǎo)致精子發(fā)生的障礙：過(guò)度增殖導(dǎo)致生殖細(xì)胞腫瘤,而過(guò)度分化則會(huì)導(dǎo)致雄性不育。 睪丸支持細(xì)胞(Sertoli cell, SCs)位于睪丸生精小管內(nèi)皮,由德國(guó)組織學(xué)家Entico Sertoli于1865年發(fā)現(xiàn)并描述,它為SSCs提供非常關(guān)鍵的支持和營(yíng)養(yǎng)作用。Sertoli細(xì)胞產(chǎn)生的膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Glial cell-line derived neurotrphic factor, GDNF)是一種調(diào)控SSCs自我更新最關(guān)鍵的細(xì)胞因子,而干細(xì)胞因子(SCF)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(BMP4)是由Sertoli細(xì)胞分泌的、能夠調(diào)控SSCs分化的關(guān)鍵因子。目前已有證據(jù)表明,LPS可以使SCs的多種細(xì)胞因子表達(dá)發(fā)生變化,但尚未有人研究LPS處理SCs對(duì)SSCs的影響及其機(jī)制。 本研究通過(guò)體外培養(yǎng)小鼠SCs和SSCs,利用免疫熒光染色和RT-PCR實(shí)驗(yàn),探討了LPS處理SCs對(duì)小鼠SSCs分化和自我更新的影響,并進(jìn)一步利用RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)探討了造成該影響的原因。進(jìn)一步闡明了LPS導(dǎo)致的睪丸炎所致的不育的發(fā)生的機(jī)制,為男性不育癥的治療提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究方法 1.SCs的體外培養(yǎng)和分組處理取5-6周齡昆明小白鼠睪丸組織,采用兩步酶法消化,差異貼壁法純化小鼠睪丸SCs,將細(xì)胞分為4組,分別是：正常對(duì)照組(Con組)、添加LPS處理1d組(1d組)、處理2d組(2d組)、處理3d組(3d組),LPS在培養(yǎng)液中的終濃度均為10μg/mL。處理后去除含LPS的培養(yǎng)液并加入不含LPS的新鮮SSCs培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)48h,收集4組培養(yǎng)液作為條件培養(yǎng)液,分別與無(wú)GDNF新鮮SSCs培養(yǎng)液1：1混合后待用；同時(shí)收集各組細(xì)胞保存?zhèn)溆谩?2. SSCs的體外培養(yǎng)和分組處理取5-7日齡昆明小乳鼠睪丸組織,按兩步酶法消化,差異貼壁法純化小鼠睪丸SSCs,將細(xì)胞分為4組,分別是：Con組、Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組,分別用前面制備待用的4組培養(yǎng)液培養(yǎng)96h,收集各組細(xì)胞,通過(guò)免疫熒光染色和RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中PLZF、oct4、PCNA和c-kit、sohlh2基因的表達(dá)變化,并通過(guò)RT-PCR檢測(cè)SSCs中Bcl6b、Etv5基因的表達(dá)變化。 3.RT-PCR檢測(cè)各組SCs GDNF、SCF、BMP4表達(dá)的變化,western blot檢測(cè)各組SCs GDNF表達(dá)的變化。 結(jié)果 1. SSCs免疫熒光染色結(jié)果顯示,PLZF與PCNA的表達(dá)按照Con組、Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組的順序遞減,Con組最高,Ⅲ組最低,各處理組與Con組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01). c-kit和sohlh2的表達(dá)按照Con組、Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組的順序遞增,Con組最低,Ⅲ組最高,各處理組與Con組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 2. SSCs RT-PCR結(jié)果顯示,PLZF、oct4基因的mRNA水平按照Con組、Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組順序降低,各處理組與Con組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；而c-kit和sohlh2基因的mRNA水平按照Con組、Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組的順序升高,處理組與Con組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 3. SSCs RT-PCR結(jié)果顯示,Bc16b、Etv5基因的mRNA水平按照Con組、Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組的順序降低,各處理組與Con組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 4. SCs RT-PCR結(jié)果顯示,GDNF的表達(dá)按照Con組、1d組、2d組和3d組的順序降低,各組與Con組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。各處理組SCF、 Bmp4的表達(dá)與Con組之間的差異則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 5. SCs Western blot結(jié)果顯示,GDNF蛋白水平按照Con組、1d組、2d組和3d組的順序而降低,各處理組與Con之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01,)。 結(jié)論 1.LPS處理小鼠SCs能加速小鼠SSCs的分化,抑制其自我更新； 2.LPS可導(dǎo)致小鼠SCs的GDNF表達(dá)減少,該變化通過(guò)下調(diào)小鼠SSCs內(nèi)Bcl6b和Etv5基因的表達(dá)來(lái)促進(jìn)其分化。
【關(guān)鍵詞】：脂多糖 睪丸支持細(xì)胞 膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 精原干細(xì)胞 分化
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R321.1
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 符號(hào)說(shuō)明13-15
• 前言15-18
• 材料與方法18-39
• 結(jié)果39-41
• 討論41-46
• 結(jié)論46-47
• 附圖表47-53
• 參考文獻(xiàn)53-58
• 致謝58-59
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文59-60
• 附件60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 王華;徐德祥;;細(xì)菌脂多糖發(fā)育毒作用研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊(cè));2008年03期

2 李毅;張帥;殷鋼;史琨;邴魯軍;郝晶;;Wnt/β-catenin信號(hào)通路在成人睪丸支持細(xì)胞增殖中的作用及其機(jī)制[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年03期

3 薛麗英;李杰;王更新;修賀明;孫輝臣;;脂多糖誘導(dǎo)的非特異性炎癥對(duì)大鼠睪丸功能的影響[J];生殖與避孕;2006年02期

  本文關(guān)鍵詞：脂多糖所致小鼠睪丸支持細(xì)胞GDNF表達(dá)減少對(duì)精原干細(xì)胞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：491262