本文關鍵詞：人臍帶間充質干細胞的原代培養(yǎng)及多向分化潛能的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討人臍帶間充質干細胞(hUCMSC)的體外分離培養(yǎng)鑒定方法及多向分化潛能。方法應用Ⅱ型膠原酶和透明質酸酶聯(lián)合消化法及組織貼塊培養(yǎng)法對hUCMSC進行體外培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下觀察不同方法獲得的hUCMSC的生長特點;臺盼藍法測定細胞傳代成活率;采用生長曲線、MTT法測定hUCMSC的增殖、流式細胞術(FCM)測定細胞周期變化及細胞免疫表型變化;采用相應試劑盒鑒定其向成脂細胞、成骨細胞的分化,采用免疫熒光細胞化學技術檢測向成心肌樣細胞的分化、采用熒光標記技術檢測hUCMSC向血管內皮細胞的分化。結果酶消化法分離培養(yǎng)的細胞1 d后,在倒置相差顯微鏡下可見細胞貼壁呈圓形生長,4 d后生長迅速呈長梭形,7 d后由中心向周圍生長且增殖明顯,10 d后達80%融合即可傳代;貼塊法培養(yǎng)的細胞7 d后,可見細胞從組織塊邊緣長出,10 d后細胞數(shù)量逐漸增多,16 d后細胞生長迅速呈單層致密排列即可傳代,細胞傳代成活率均為96%以上。2種方法獲得的第3代細胞生長曲線近似"S"形、MTT法顯示3~5 d細胞增殖較明顯;酶消化法培養(yǎng)的細胞G0/G1期和S+G2/M期所占比例分別為88.78%和10.21%,組織貼塊法培養(yǎng)的細胞G0/G1期和S+G2/M期所占比例分別為84.82%和13.87%,細胞DNA周期無明顯差異;2種方法獲得的細胞經FCM檢測CD90、CD105、CD73陽性率均為99%以上為高表達;CD45、CD34、CD14、CD11b、CD79a、CD19、HLA-DR低表達;2種方法獲得的細胞在體外誘導都能向成骨細胞、成脂細胞、成心肌樣細胞及血管內皮細胞分化,其誘導陽性率均為90%以上。結論酶消化法和貼塊法均可高效獲得hUCMSC,與貼塊法培養(yǎng)相比較,酶消化法能更有效的獲得擴增迅速、細胞成分單一的細胞。
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學附屬北京安貞醫(yī)院;北京市心肺血管疾病研究所分子生物學研究室;北京市心肺血管疾病研究所實驗中心;首都醫(yī)科大學附屬北京安貞醫(yī)院心外科;
【關鍵詞】： 人臍帶間充質干細胞 原代培養(yǎng) 誘導分化
【基金】：國家自然科學基金(81070077) 省部共建重點教育部心血管重塑相關疾病重點實驗室項目(110267) 北京市優(yōu)秀人才培養(yǎng)資助項目(2012D003034000009) 北京市自然科學基金(7072012)
【分類號】：R329
【正文快照】： 間充質干細胞(mesenchymal stemcells,MSC)來源于發(fā)育早期中胚層,廣泛存在于骨髓、脂肪、臍血等多種組織中[1-2],具有自我更新,高度增殖及多向分化潛能的成體干細胞[3-4],MSC逐漸成為替代治療和基因治療領域中極具實用價值的細胞來源,在組織工程領域具有廣闊的應用前景。近年

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 柳菁;宇麗;許超;羅二梅;;長期培養(yǎng)人臍帶間充質干細胞分化能力改變的研究[J];中國生物工程雜志;2012年02期

2 阮中寶;楊向軍;陳各才;朱莉;李偉;楊兵;歐陽溪;潘少輝;;5-氮雜胞苷誘導人臍帶間充質干細胞向心肌樣細胞的分化[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年36期

3 朱少芳;何援利;付霞霏;;人臍帶間充質干細胞的生物學特性和超微結構[J];中國醫(yī)學科學院學報;2011年04期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 邢昕;呂蓉;李素萍;劉忠;;體外分離培養(yǎng)人源性脂肪間充質干細胞及其鑒定[J];中國輸血雜志;2013年08期

2 王銘楊;熊云彪;;人臍帶來源間充質干細胞在神經系統(tǒng)疾病中的研究進展[J];貴州醫(yī)藥;2013年11期

3 牧仁;邊艷超;浦亞斌;李向臣;王鳳龍;關偉軍;;北京油雞胚胎肝臟間充質干細胞的生物學特性[J];華中農業(yè)大學學報;2013年06期

4 許薇薇;黃一飛;;人脂肪組織來源干細胞眼科基礎研究應用現(xiàn)狀[J];解放軍醫(yī)學院學報;2013年09期

5 張亞倩;梁軍;田沁森;丁玉芳;余道海;;人臍帶間充質干細胞分離培養(yǎng)方法的優(yōu)化[J];牡丹江醫(yī)學院學報;2013年05期

6 何宏亮;李建國;高志良;;人工肝和干細胞在肝衰竭治療中的進展[J];臨床肝膽病雜志;2013年09期

7 Juan Xu;Bo Yu;Christine Hong;Cun-Yu Wang;;KDM6B epigenetically regulates odontogenic differentiation of dental mesenchymal stem cells[J];International Journal of Oral Science;2013年04期

8 汪兆艷;楊印祥;王倩;王彩英;屈素清;金慧玉;欒佐;;人臍帶源間充質干細胞體外成脂、成骨、成軟骨誘導分化[J];轉化醫(yī)學雜志;2013年06期

9 趙萌;王樹榮;;臍帶間充質干細胞在肝纖維化中的研究進展[J];湖南中醫(yī)雜志;2013年10期

10 龐希寧;王竟;施萍;孟濤;霍雙枝;張殿寶;譚麗萍;;人羊膜間充質干細胞的超微結構觀察[J];基礎醫(yī)學與臨床;2013年11期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 阮中寶;5-氮雜胞苷誘導人臍帶間充質干細胞向心肌細胞分化及相關信號通路研究[D];蘇州大學;2012年

2 梁軍;Wharton's jelly間質干細胞分化為膽堿能神經元的實驗研究[D];吉林大學;2013年

3 牧仁;北京油雞胚胎肝臟來源間充質干細胞的分離培養(yǎng)及生物學特性研究[D];內蒙古農業(yè)大學;2013年

4 朱天琦;GDNF和NT-3雙基因誘導BMSCs分化為神經樣細胞的實驗研究[D];華中科技大學;2013年

5 茍麗娟;人骨髓間充質干細胞誘導分化為軟骨細胞過程中microRNA作用機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

6 陳書連;1、骨髓間充質干細胞對小鼠異基因骨髓移植后aGVHD的作用研究 2、成人急性淋巴細胞白血病自體移植的臨床研究及相關預后因素[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

7 關劍;胰腺癌間充質干細胞樣腫瘤相關纖維母細胞功能研究及維甲酸對腫瘤相關纖維母細胞抑制性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

8 楊舟鑫;CD106是具有強免疫調節(jié)功能的胎盤絨毛膜間充質干細胞的標志[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

9 付蘇;脂肪來源基質血管成分細胞與脂肪顆粒共移植后的生物學轉歸[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

10 王有為;臍帶間充質干細胞臨床前安全性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王思平;肌肉注射異種臍帶間充質細胞對健康Wistar大鼠心肌VEGF、cTnI表達及血清VEGF、HGF、IGF-1和GM-CSF的影響[D];青島大學;2012年

2 李柳;誘導hUC-MSCs和VECs轉化為角膜內皮樣細胞的實驗研究[D];暨南大學;2012年

3 徐善慧;三種病毒載體對人臍帶華通膠間充質干細胞轉染效果及基因表達的對比研究[D];第二軍醫(yī)大學;2012年

4 武爽;魯西黃牛臍帶間充質干細胞的分離培養(yǎng)及生物學特性研究[D];中國農業(yè)科學院;2012年

5 李敏;肋軟骨膜、肋軟骨和骨髓來源間充質干細胞的比較[D];重慶醫(yī)科大學;2012年

6 張培培;人臍帶間充質干細胞移植治療腦缺血損傷大鼠的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學;2012年

7 馮莉;不同供者臍帶間充質干細胞生物學特性的比較研究[D];天津大學;2012年

8 顧麗亞;大鼠骨髓間充質干細胞exosome對自身心肌分化及抗凋亡實驗研究[D];蘇州大學;2013年

9 曲戈;IL-24基因修飾的間充質干細胞向肺癌靶向遷移的體外研究[D];鄭州大學;2013年

10 徐揚陽;重組人堿性成纖維細胞生長因子對脂肪干細胞分化的影響[D];鄭州大學;2013年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 袁源;楊樹源;韓忠朝;張曉輝;;人臍帶間充質干細胞體外擴增和向神經元樣細胞定向誘導分化的研究[J];中華神經醫(yī)學雜志;2006年03期

2 張勇,蔡振杰,陳如坤;小鼠骨髓基質干細胞體外分化為前體心肌細胞的初步實驗[J];第一軍醫(yī)大學學報;2005年02期

3 伍長學;張爾永;楊思遠;馬建e

本文編號：487088