本文關(guān)鍵詞：基于多重置換擴(kuò)增技術(shù)的RNA病毒基因組擴(kuò)增方法研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為了便于新發(fā)或罕見病毒性傳染病的篩查檢測(cè),本研究利用多重置換擴(kuò)增技術(shù),以負(fù)鏈RNA病毒—發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒和正鏈RNA病毒—登革病毒為模擬樣本探索臨床樣本中RNA病毒基因組非特異性擴(kuò)增方法。研究中通過梯度稀釋的RNA病毒模擬樣本中可能存在的不同豐度的病原體,樣本核酸依次加工成單鏈cDNA、雙鏈cDNA、T4DNA連接酶處理后的雙鏈cDNA以及添加外源輔助RNA后合成并連接的雙鏈cDNA形式,然后進(jìn)行Phi29DNA聚合酶等溫?cái)U(kuò)增,使用熒光定量PCR方法比較各種方法對(duì)RNA病毒核酸擴(kuò)增的影響。結(jié)果顯示,對(duì)于不同類型的RNA病毒模擬標(biāo)本,多重置換擴(kuò)增對(duì)于單鏈及雙鏈cDNA的擴(kuò)增效果有限,而雙鏈cDNA經(jīng)DNA連接酶處理后的擴(kuò)增能達(dá)到6×103倍;在cDNA合成過程中加入外源輔助RNA,模擬樣本中病毒基因組的擴(kuò)增可達(dá)2×105倍,尤其是對(duì)含有低豐度病原體的模擬樣本擴(kuò)增效果的改善更為明顯。本研究摸索建立了基于多重置換擴(kuò)增技術(shù)的RNA病毒基因組擴(kuò)增方法,能夠?qū)颖局械拓S度RNA病毒基因組實(shí)現(xiàn)有效擴(kuò)增,可滿足開展多種病原體篩查檢測(cè)的需求。
【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【關(guān)鍵詞】： 多重置換擴(kuò)增 PhiDNA聚合酶 RNA病毒
【基金】：傳染病防治重大專項(xiàng)—重大傳染病應(yīng)急處置檢測(cè)平臺(tái)(No.2011ZX10004-001,2013ZX10004-001)
【分類號(hào)】：R341
【正文快照】： 核酸檢測(cè)是常用的病毒性傳染病實(shí)驗(yàn)室診斷方法,多是在一個(gè)獨(dú)立的反應(yīng)體系中進(jìn)行源于臨床標(biāo)本的一種或一組相關(guān)病毒的核酸擴(kuò)增檢測(cè)。但是,在新發(fā)或罕見傳染病發(fā)生時(shí),往往需要進(jìn)行多個(gè)病原體的逐一排查和確定,致使在實(shí)際的疾病控制和臨床診斷過程中常常面臨實(shí)際臨床樣本量不足

【相似文獻(xiàn)】

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