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焦慮預處理對急性帕金森病小鼠模型的影響

發(fā)布時間:2017-06-22 13:05

  本文關鍵詞:焦慮預處理對急性帕金森病小鼠模型的影響,,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


【摘要】:目的:帕金森病(Parkinson's disease,PD)是中老年常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,主要臨床表現(xiàn)為運動弛緩、震顫、強直、姿勢平衡障礙等運動癥狀,此外,常伴發(fā)焦慮、抑郁、睡眠障礙、便秘、認知功能減退等非運動癥狀,其中,焦慮對PD患者的病情發(fā)展、生活質(zhì)量、預后都有很大的影響,但是到目前為止對有引起焦慮事件預刺激的PD患者,各方面的改變了解甚少。因此,本實驗采用C57BL/6J小鼠建立四種實驗分組:空白對照組、焦慮預處理模型、急性PD模型、焦慮預處理的急性PD模型,旨在探討焦慮預處理對急性PD小鼠模型情緒、運動功能、學習記憶功能以及黑質(zhì)-紋狀體多巴胺能神經(jīng)元的影響。方法:將68只13周齡23~30g C57BL/6J健康雄性小鼠隨機分為以下4組(n=17):(1)正常組(CON組):正常健康小鼠,不做任何處理;(2)焦慮預處理組(ANX組):采用改良Vogel飲水沖突法結(jié)合束縛方法預處理的小鼠模型;(3)急性PD模型組(PD組):采用腹腔注射MPTP制造急性PD模型;(4)焦慮預處理的急性PD模型組(ANX+PD組):在焦慮預處理后第3天給予小鼠MPTP藥物,用于制造先有焦慮情緒后患PD的小鼠模型。各組小鼠在相同環(huán)境下飼養(yǎng),焦慮預處理后第5,6,7和8-13天依次分別行曠場實驗,高架十字迷宮實驗,爬桿試驗,水迷宮實驗檢測小鼠行為學改變,焦慮預處理后第14天取各組小鼠大腦,采用免疫組織化學觀察黑質(zhì)-紋狀體酪氨酸羥化酶陽性(tyrosine hydroxylase positive,TH+)神經(jīng)元的改變。結(jié)果:1焦慮預處理對小鼠的影響1.1焦慮預處理對小鼠情緒的影響焦慮預處理后第2天行高架十字迷宮實驗,結(jié)果顯示:與CON組比較,ANX組開臂進入次數(shù)占總進臂次數(shù)百分比(OE%)和開臂滯留時間占總進臂時間百分比(OT%)均顯著減少(P0.05)。表明小鼠存在焦慮情緒,焦慮預處理成功。焦慮預處理后第5天行礦場實驗,結(jié)果顯示:與CON組比較,ANX組路程百分比、時間百分比、穿格次數(shù)百分比和總穿格次數(shù)均有一定程度的減少,但差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。表明小鼠無焦慮、抑郁情緒。焦慮造模后第6天再次行高架十字迷宮實驗,結(jié)果顯示:與CON組比較,ANX組OE%、OT%差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。1.2焦慮預處理對小鼠運動功能的影響焦慮預處理后第7天行爬桿實驗,結(jié)果顯示:與CON組比較,ANX組爬桿時間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。1.3焦慮預處理對小鼠學習、記憶能力的影響焦慮預處理后第8-13天行水迷宮實驗,結(jié)果顯示:在定向航行實驗階段,各組小鼠定向航行5 d的尋臺潛伏期逐漸縮短。與CON組比較,ANX組尋臺潛伏期顯著縮短(P0.05)。在空間搜索實驗階段,與CON組比較,ANX組小鼠運動路程、滯留時間、穿臺次數(shù)差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。1.4焦慮預處理對小鼠黑質(zhì)-紋狀體TH+神經(jīng)元的影響1.4.1黑質(zhì)TH+神經(jīng)元的改變焦慮預處理后第14天行TH免疫組織化學染色,結(jié)果顯示:ANX組與CON組小鼠黑質(zhì)TH+神經(jīng)元形態(tài)一致,神經(jīng)元排列致密、整齊,胞核飽滿,核仁清晰,平均每200倍視野陽性神經(jīng)元數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。1.4.2紋狀體TH+神經(jīng)元平均光密度(Mean Optical Density,MOD)的改變與CON組比較,ANX組紋狀體TH+神經(jīng)元的MOD顯著減少(P0.05)。2 MPTP制造急性PD模型對小鼠的影響2.1 MPTP制造急性PD模型對小鼠情緒的影響MPTP注射前1天行高架十字迷宮,結(jié)果顯示:與CON組比較,PD組OE%和OT%差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。與ANX組比較,PD組OE%和OT%均顯著增多(P0.05)。MPTP注射后第3天行礦場實驗,結(jié)果顯示:與CON組和ANX組比較,PD組路程百分比、時間百分比、穿格次數(shù)百分比和總穿格次數(shù)差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。注射MPTP后第4天行高架十字迷宮,實驗結(jié)果:與CON組和ANX組比較,PD組OE%和OT%的差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.2 MPTP制造急性PD模型對小鼠運動功能的影響MPTP注射后數(shù)分鐘內(nèi)小鼠出現(xiàn)震顫、弓背、豎尾、豎毛、后肢張開、步態(tài)不穩(wěn),呼吸急促,且隨著給藥次數(shù)的增加,其行為學出現(xiàn)時間越來越快,越來越明顯。這些癥狀常在半小時內(nèi)緩解,在24小時內(nèi)基本恢復。MPTP注射后第5天行爬桿實驗,結(jié)果顯示:與CON組和ANX組比較,PD組小鼠爬桿時間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.3 MPTP制造急性PD模型對小鼠學習、記憶能力的影響MPTP注射后第6-11天行水迷宮實驗,結(jié)果顯示:與CON組和ANX組比較,PD組在定向航行實驗階段的尋臺潛伏期顯著延長(P0.05),且在空間搜索實驗階段的運動路程、滯留時間、穿臺次數(shù)均顯著減少,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.4 MPTP制造急性PD模型對小鼠黑質(zhì)-紋狀體TH+神經(jīng)元的影響2.4.1黑質(zhì)TH+神經(jīng)元的改變MPTP注射后第12天行TH免疫組織化學染色,結(jié)果顯示:PD組小鼠黑質(zhì)殘留TH+神經(jīng)元皺縮,不飽滿,梭形改變,突起減少。與CON組和ANX組比較,PD組平均每200倍視野TH+神經(jīng)元數(shù)較CON組下降49.70%,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.4.2紋狀體TH+神經(jīng)元MOD的改變與CON組和ANX組比較,PD組紋狀體TH+神經(jīng)元的MOD降至CON組水平的69.90%,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3焦慮預處理對急性PD小鼠模型的影響3.1焦慮預處理對急性PD小鼠模型情緒的影響焦慮預處理后第2天行高架十字迷宮實驗,結(jié)果顯示:與CON組和PD組比較,ANX+PD組OE%和OT%均顯著減少(P0.05)。與ANX組比較,ANX+PD組OE%和OT%差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。表明ANX+PD組小鼠同ANX組小鼠一樣,均存在明顯的焦慮情緒,焦慮預處理成功。焦慮預處理后第5天行礦場實驗,結(jié)果顯示:與CON組、ANX組和PD組比較,ANX+PD組路程百分比、時間百分比、穿格次數(shù)百分比和總穿格次數(shù)差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。焦慮造模后第6天再次行高架十字迷宮實驗,結(jié)果顯示:與CON組、ANX組和PD組比較,ANX+PD組OE%和OT%差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.2焦慮預處理對急性PD小鼠模型運動功能的影響焦慮預處理后第7天行爬桿實驗,結(jié)果顯示:與CON組、ANX組和PD組比較,ANX+PD組爬桿時間均顯著增加(P0.05)。3.3焦慮預處理對急性PD小鼠模型學習、記憶能力的影響焦慮預處理后第8-13天行水迷宮實驗,結(jié)果顯示:在定向航行實驗階段,與CON組和ANX組比較,ANX+PD組尋臺潛伏期顯著延長(P0.05)。與PD組比較,ANX+PD組尋臺潛伏期差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。在空間搜索實驗階段,與CON組和ANX組比較,ANX+PD組運動路程、滯留時間、穿臺次數(shù)均顯著減少(P0.05)。與PD組比較,ANX+PD組運動路程、滯留時間、穿臺次數(shù)差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.4焦慮預處理對急性PD小鼠模型黑質(zhì)-紋狀體TH+神經(jīng)元的影響3.4.1黑質(zhì)TH+神經(jīng)元的改變焦慮預處理后第14天行TH免疫組織化學染色,結(jié)果顯示:ANX+PD組小鼠黑質(zhì)殘留TH+神經(jīng)元皺縮,不飽滿,梭形改變,突起減少,平均每200倍視野陽性神經(jīng)元數(shù)較CON組下降49.40%。與CON組和ANX組比較,ANX+PD組黑質(zhì)TH+神經(jīng)元數(shù)均顯著減少(P0.05)。與PD組比較,ANX+PD組黑質(zhì)TH+神經(jīng)元數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.4.2紋狀體TH+神經(jīng)元MOD的改變與CON組和ANX組比較,ANX+PD組紋狀體TH+神經(jīng)元的MOD降至CON組水平的69.42%,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與PD組比較,ANX+PD組紋狀體TH+神經(jīng)元的MOD有一定程度下降,但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:1焦慮預處理可使小鼠產(chǎn)生明顯的焦慮情緒,但維持時間較短;可提高小鼠學習能力,損傷紋狀體多巴胺能神經(jīng)纖維,但對小鼠運動功能、記憶能力以及黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元無明顯影響。2 MPTP制造急性PD小鼠模型,小鼠運動功能在給藥半小時內(nèi)明顯損傷,但隨著時間推移逐漸恢復,24h內(nèi)基本恢復正常;顯著降低小鼠學習、記憶能力;嚴重損害黑質(zhì)-紋狀體多巴胺能神經(jīng)元和神經(jīng)纖維;但不引起小鼠焦慮、抑郁情緒。3焦慮預處理明顯加重急性PD小鼠模型運動功能損害,但對急性PD小鼠模型情緒、學習記憶能力以及黑質(zhì)-紋狀體多巴胺神經(jīng)元和神經(jīng)纖維無明顯影響。
【關鍵詞】:焦慮預處理 帕金森病 焦慮 抑郁 運動功能 認知功能 多巴胺能神經(jīng)元
【學位授予單位】:河北醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2016
【分類號】:R742.5;R-332
【目錄】:
  • 中文摘要4-9
  • 英文摘要9-15
  • 英文縮寫15-16
  • 前言16-17
  • 材料與方法17-25
  • 結(jié)果25-30
  • 附圖30-37
  • 討論37-44
  • 結(jié)論44-45
  • 參考文獻45-52
  • 綜述 帕金森焦慮的研究進展52-60
  • 參考文獻57-60
  • 致謝60-61
  • 個人簡歷61

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