本文關(guān)鍵詞：血小板膜受體糖蛋白Ib-IX-V復(fù)合物在瞬時轉(zhuǎn)染的HEK293T細胞中的異常表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：血小板膜受體糖蛋白(glycoprotein,GP)Ib-IX-V復(fù)合物在血小板活化過程中起到關(guān)鍵作用,因此其結(jié)構(gòu)及功能一直是研究的熱點和難點。由于血小板缺乏細胞核,研究者通常需將野生型或突變型的GPIb-IX-V基因轉(zhuǎn)染至其他哺乳動物細胞系中(如CHO、HEK 293T等)以研究其結(jié)構(gòu)與功能,因此GPIb-IX-V復(fù)合物在這些細胞系中是否能如實的反映其在血小板中的情況,是決定這些細胞系是否適合GPIb-IX-V復(fù)合物研究的關(guān)鍵。本研究通過檢測GPIb-IX-V復(fù)合物在不同細胞系中的表達情況,明確細胞系差異是否可能干擾復(fù)合物的表達,進而找出研究GPIb-IX-V復(fù)合物的最適細胞系。在不同種屬、不同組織來源的常用細胞系(如CHO、HEK 293T、HeLa等)中單獨或共轉(zhuǎn)染GPIb-IX-V復(fù)合物的亞基,并用流式細胞術(shù)檢測GPIb-IX-V復(fù)合物在膜表面的表達量。結(jié)果發(fā)現(xiàn):CHO細胞在瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后GPV在細胞膜表面表達依賴于其與GPIb-IX復(fù)合物的相互作用,與血小板中的情況一致。相反,在HEK 293T細胞系中,盡管GPIb-IX復(fù)合物的表達情況與CHO細胞及血小板中一致,但是GPV在細胞膜表面的表達不再依賴于GPIb-IX復(fù)合物;進一步在HeLa、MES13及HUVEC細胞系中的研究發(fā)現(xiàn),GPV可以在HeLa及MES13細胞膜上獨立表達,但是在HUVEC細胞表面不表達,提示GPIb-IX-V復(fù)合物各亞基之間的依賴性(進而表現(xiàn)為膜表面的表達量)在不同的細胞系中有所不同。結(jié)論:本研究為今后對于GPIb-IX-V復(fù)合物的研究具有一定的指導(dǎo)意義,尤其是在細胞系的選擇上。HEK 293T細胞系極可能對研究結(jié)果造成偏倚,因而并非研究GPIb-IX-V復(fù)合物尤其是GPV亞基的最佳選擇。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海兒童醫(yī)學(xué)中心兒科轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 血小板膜受體 GPIb-IX-V復(fù)合物 HEK-T細胞 CHO細胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年基金,編號81100346
【分類號】：R341
【正文快照】： 人血小板表面存在多種膜受體,并在血小板活化過程中起到不可或缺的作用。其中一類重要的血小板膜受體糖蛋白(Glycoprotein,GP)Ib-IX-V復(fù)合物,可通過GPIbα亞基與受損血管壁細胞上暴露的血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)結(jié)合,介導(dǎo)血小板在受損部位的粘附,并啟動相

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本文編號：469956