發(fā)布時間：2025-03-18 22:42

　　目的:急性肝衰竭（ALF）可由多種原因引起的一種綜合征,表現為大量肝細胞壞死及（或）嚴重肝功能障礙,短期內患者可發(fā)生肝性腦病。ALF是嚴重危害人類健康的疾病。肝性腦�。℉E）是ALF晚期最常見的致死性并發(fā)癥,其發(fā)病機制迄今尚未完全闡明,目前已提出多種學說。其中高血氨被認為是最關鍵的因素之一。氨是一種弱堿,在生理性pH 7.4時,氨發(fā)生質子化,98%以上以NH₄⁺的形式存在。游離的NH₃是脂溶性的,可以被動通過細胞膜。近年研究發(fā)現,氨的轉運,除了伴隨著濃度梯度的被動擴散之外,還有NH₄⁺/NH₃的主動轉運蛋白參與其中。哺乳動物中的氨轉運蛋白,即Rhesus相關糖蛋白是近年來研究較多的氨轉運體,尤其RhBG/Rhbg和RhCG/Rhcg在腎臟氨分泌中的作用已通過基因敲除等實驗得出初步結論。而ALF導致的HE中,尚不清楚腦組織中是否存在NH₄⁺/NH₃的主動轉運蛋白。本研究通過建立ALF所致肝性腦病...

【文章頁數】：78 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分：急性肝衰竭肝性腦病模型中腦組織氨轉運體的表達
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 實驗動物
            2.1.2 實驗藥物
            2.1.3 主要試劑配制
            2.1.4 主要實驗器材
        2.2 動物分組及模型制備
        2.3 血清丙氨酸氨基轉移酶(alanine aminotransferase, ALT)檢測
        2.4 肝組織病理學檢查
        2.5 實驗動物不同時間點血氨及腦實質氨水平檢測
            2.5.1 繪制標準曲線
            2.5.2 樣本準備
            2.5.3 加入反應混合物
            2.5.4 測量
        2.6 應用Western blot方法觀察腦組織氨轉運體蛋白的表達
            2.6.1 腦組織總蛋白提取
            2.6.2 BCA法測腦組織蛋白濃度
            2.6.3 Western blot方法檢測腦組織氨轉運體蛋白的表達
        2.7 逆轉錄-聚合酶鏈式反應（reverse transcription PCR，RT-PCR）檢測腦組織Rhbg、Rhcg基因m RNA的相對含量
            2.7.1 腦組織RNA的提取
            2.7.2 逆轉錄合成c DNA
            2.7.3 PCR（三步法）
            2.7.4 瓊脂糖凝膠電泳：
        2.8 統(tǒng)計學處理
    3 結果
        3.1 各組動物給藥后反應及死亡情況
        3.2 血清ALT水平
        3.3 肝臟HE染色結果
        3.4 各組不同時間點小鼠血氨及腦組織氨水平測定
        3.5 腦組織氨轉運體蛋白表達情況
        3.6 腦組織氨轉運體m RNA表達變化
    4 討論
    5 結論
第二部分：腫瘤壞死因子-α對腦組織氨轉運體表達的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 實驗動物與細胞
            2.1.2 實驗藥物
            2.1.3 主要試劑配制
            2.1.4 主要實驗器材
        2.2 動物分組及模型制備
        2.3 血清丙氨酸氨基轉移酶(alanine aminotransferase, ALT)檢測
        2.4 血清腫瘤壞死因子-α ( TNF-α )水平測定
        2.5 肝組織病理學檢查
        2.6 血氨及腦組織氨水平檢測
            2.6.1 繪制標準曲線
            2.6.2 樣本準備
            2.6.3 加入反應混合物
            2.6.4 測量
        2.7 TNF-α對人腦微血管內皮細胞中氨轉運體表達的影響
        2.8 Western blot方法分析腦組織或HBMEC中氨轉運體蛋白的相對表達
            2.8.1 腦組織或HBMEC總蛋白提取
            2.8.2 BCA法測蛋白濃度
            2.8.3 Western blot方法檢測腦組織或HBMEC中氨轉運體蛋白相對表達
        2.9 逆轉錄-聚合酶鏈式反應（reverse transcription PCR，RT-PCR）檢測腦組織及HBMEC中Rhbg/Rh BG、Rhcg/Rh CG mRNA的相對含量
            2.9.1 腦組織或HBMEC中總RNA的提取
            2.9.2 逆轉錄合成c DNA
            2.9.3 PCR（三步法）
            2.9.4 瓊脂糖凝膠電泳
        2.10 免疫組化( Immunohistochemistry, IHC )及免疫熒光法(Immunofluorescent assays, IFA)觀察Rhcg蛋白在小鼠腦組織中的表達部位
        2.11 統(tǒng)計學處理
    3 結果
        3.1 各組動物給藥后反應及死亡率情況
        3.2 血清ALT水平
        3.3 D-Gal N聯(lián)合LPS組及對照組血清TNF-α水平
        3.4 肝臟HE染色結果
        3.5 血氨及腦組織氨水平
        3.6 腦組織氨轉運體蛋白表達情況
        3.7 腦組織或HBMEC中氨轉運體m RNA相對表達
        3.8 腦組織中氨轉運體Rhcg的表達部位
    4 討論
    5 結論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡介



本文編號：4036285