目的:研究MGRN1對(duì)小鼠睪丸支持細(xì)胞自噬的影響。方法:體外培養(yǎng)小鼠睪丸支持細(xì)胞株(TM4細(xì)胞)利用RNAi下調(diào)TM4細(xì)胞中MGRN1的表達(dá),然后利用Western印跡(WB)檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白(LC3-II/I、ATG-5和ATG-7)的表達(dá),免疫熒光及電鏡檢測(cè)MGRN1下調(diào)后TM4細(xì)胞的自噬小體。結(jié)果:MGRN1下調(diào)后,WB發(fā)現(xiàn)TM4細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白(LC3-II/I、ATG-5和ATG-7)表達(dá)增加,熒光顯微鏡可觀察到TM4細(xì)胞中自噬小體增加,與對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),電鏡可觀察到TM4細(xì)胞中自噬小體增加。結(jié)論:MGRN1影響睪丸支持細(xì)胞的自噬,具體分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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【部分圖文】：

圖4電鏡觀察3組TM4細(xì)胞中的自噬小體

結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,MGRN1下調(diào)明顯誘導(dǎo)了細(xì)胞自噬(圖4)。3討論

圖1RNAi下調(diào)TM4細(xì)胞中MGRN1mRNA和蛋白的表達(dá)

為研究MGRN1基因?qū)ψ允傻挠绊?采用Western印跡分析各組自噬相關(guān)蛋白(LC3-II/I、ATG-5和ATG-7)的表達(dá)變化以評(píng)價(jià)自噬形成,結(jié)果顯示,MGRN1下調(diào)后TM4細(xì)胞中LC3-II/I、ATG-5、ATG-7的表達(dá)增加(MGRN1下調(diào)組與對(duì)照組相比,P<0.05)....

圖2MGRN1下調(diào)的TM4細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白(LC3-II/I、ATG-5和ATG-7)的表達(dá)增加

圖1RNAi下調(diào)TM4細(xì)胞中MGRN1mRNA和蛋白的表達(dá)2.3熒光顯微鏡觀察MGRN1表達(dá)下調(diào)后小鼠TM4細(xì)胞自噬小體的數(shù)量增加

圖3熒光顯微鏡觀察3組細(xì)胞中的自噬小體(×100)

表3各組GFP-LC3陽(yáng)性細(xì)胞率(%)Table3.GFP-LC3positivecellsindifferentgroupsofthemouseTM4cells(%)GroupsPositivecells(%)MGRN1knockdown....

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