目的:制備高活性EB病毒Zta優(yōu)勢(shì)表位抗原并初步評(píng)價(jià)抗原活性。方法:利用生物學(xué)軟件分析Zta抗原的B細(xì)胞表位分布,選取含有優(yōu)勢(shì)表位的抗原區(qū)段,然后利用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行克隆表達(dá)獲得純化抗原,采用ELISA方法初步評(píng)價(jià)優(yōu)勢(shì)表位抗原的檢測(cè)性能。結(jié)果:篩選確定Zta優(yōu)勢(shì)表位抗原區(qū)段為1～185 aa,并獲得了高效表達(dá)的Zta優(yōu)勢(shì)表位抗原,基于該抗原建立的Zta-IgA間接ELISA方法可以有效區(qū)分鼻咽癌患者和健康對(duì)照。結(jié)論:獲得的優(yōu)勢(shì)表位抗原Zta可用于鼻咽癌患者的早期篩查和診斷。

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圖1Zta抗原B細(xì)胞表位分析

將PCR產(chǎn)物純化后經(jīng)雙酶切克隆至pBVGST載體，構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pBVGST-Zta。將測(cè)序正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)，Zta優(yōu)勢(shì)表位抗原為包涵體表達(dá)，表達(dá)量較高，Ni柱純化后獲得純化抗原，SDS-PAGE鑒定結(jié)果顯示Zta優(yōu)勢(shì)表位抗原相對(duì)分子質(zhì)量約為38.3×103，經(jīng)測(cè)....

圖2Zta優(yōu)勢(shì)表位抗原基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳鑒定M:DL2000DNAmarker;1:Zta優(yōu)勢(shì)表位抗原基因（555bp)

圖1Zta抗原B細(xì)胞表位分析2.4抗原活性初步評(píng)價(jià)

圖3Zta抗原的SDS-PAGE鑒定

EBV是鼻咽癌的重要誘發(fā)因子，鼻咽癌患者一般在癥狀出現(xiàn)前3年血清EBV抗體水平呈持續(xù)升高，尤其是IgA抗體水平，借此可以實(shí)現(xiàn)NPC患者的早期篩查和診斷[6-7]。但目前所使用的檢測(cè)試劑盒的特異性、敏感度均不能達(dá)到令人滿意的臨床效果，因此制備優(yōu)質(zhì)抗原成為進(jìn)一步提高檢測(cè)靈敏度和特異性....

圖4Zta優(yōu)勢(shì)表位抗原血清學(xué)檢測(cè)性能

圖3Zta抗原的SDS-PAGE鑒定EBV在細(xì)胞中的生活周期可分為潛伏期和裂解期，在生活周期的不同階段可表達(dá)不同的蛋白產(chǎn)物。EBV在裂解期所表達(dá)的病毒蛋白可分為立即早期蛋白、早期蛋白及晚期蛋白3類(lèi)。其中，早期蛋白與病毒DNA復(fù)制有關(guān)，晚期蛋白與病毒包裝有關(guān)，而立即早期蛋白則主要....

本文編號(hào)：3980870