目的建立穩(wěn)定表達外源Dll1、Dll3、Dll4基因的MLO-Y4骨細胞株,研究骨細胞Notch信號Delta-like配體Dll1、Dll3、Dll4對骨髓基質細胞成骨分化的影響。方法用過表達Dll1、Dll3、Dll4基因的重組慢病毒液感染MLO-Y4樣骨細胞,嘌呤霉素篩選分別穩(wěn)定表達Dll1、Dll3及Dll4基因的MLO-Y4骨細胞株。采用實時熒光定量PCR(real time fluorescence quantitative,qPCR)對篩選出來的MLO-Y4骨細胞株中Dll1、Dll3及Dll4基因的表達進行鑒定。將3種細胞株分別與野生型小鼠骨髓基質細胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)進行共培養(yǎng),采用堿性磷酸酶(ALP)染色及ALP定量檢測共培養(yǎng)3 d ALP活性變化;qPCR檢測共培養(yǎng)3 d成骨相關標志基因及Notch信號靶基因的表達水平,在使用Notch信號抑制劑DAPT后檢測上述指標。結果與陰性對照組相比,Dll1、Dll3及Dll4轉染組中Dll1、Dll3及Dll4 mRNA的水平顯著增加(P<0.05)。共培養(yǎng)3 d后,...

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圖5qPCR檢測骨細胞中Delta-like基因的過表達對BMSC中Notch信號的影響

圖4qPCR檢測骨細胞中Delta-like基因的過表達對BMSC成骨相關標志基因表達的影響2.5DAPT抑制骨細胞中Delta-like基因過表達誘導的BMSC成骨分化

圖6DAPT對骨細胞Delta-like基因過表達增強BMSC成骨分化中ALP活性的影響

而圖7顯示,在加入DAPT后MLO-Y4-Dll4組ALP、Runx2、OPN及CollagenⅠ顯著降低(P<0.05),表明Notch經(jīng)典信號在骨細胞Dll4引起的BMSC成骨分化中起到重要作用。雖然成骨分化被抑制,但與對照組相比,仍然促進了ALP的活性及成骨相關標志基因的表....

圖7qPCR檢測DAPT對骨細胞Delta-like基因過表達誘導的BMSC成骨分化中標志基因表達量的影響

圖6DAPT對骨細胞Delta-like基因過表達增強BMSC成骨分化中ALP活性的影響圖8qPCR檢測DAPT對骨細胞Delta-like過表達激活的BMSCNotch信號的影響

圖8qPCR檢測DAPT對骨細胞Delta-like過表達激活的BMSCNotch信號的影響

圖7qPCR檢測DAPT對骨細胞Delta-like基因過表達誘導的BMSC成骨分化中標志基因表達量的影響2.6DAPT抑制骨細胞Delta-like基因過表達激活的BMSC中Notch信號

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