目的建立穩(wěn)定表達(dá)外源Dll1、Dll3、Dll4基因的MLO-Y4骨細(xì)胞株,研究骨細(xì)胞Notch信號Delta-like配體Dll1、Dll3、Dll4對骨髓基質(zhì)細(xì)胞成骨分化的影響。方法用過表達(dá)Dll1、Dll3、Dll4基因的重組慢病毒液感染MLO-Y4樣骨細(xì)胞,嘌呤霉素篩選分別穩(wěn)定表達(dá)Dll1、Dll3及Dll4基因的MLO-Y4骨細(xì)胞株。采用實(shí)時熒光定量PCR(real time fluorescence quantitative,qPCR)對篩選出來的MLO-Y4骨細(xì)胞株中Dll1、Dll3及Dll4基因的表達(dá)進(jìn)行鑒定。將3種細(xì)胞株分別與野生型小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)進(jìn)行共培養(yǎng),采用堿性磷酸酶(ALP)染色及ALP定量檢測共培養(yǎng)3 d ALP活性變化;qPCR檢測共培養(yǎng)3 d成骨相關(guān)標(biāo)志基因及Notch信號靶基因的表達(dá)水平,在使用Notch信號抑制劑DAPT后檢測上述指標(biāo)。結(jié)果與陰性對照組相比,Dll1、Dll3及Dll4轉(zhuǎn)染組中Dll1、Dll3及Dll4 mRNA的水平顯著增加(P<0.05)。共培養(yǎng)3 d后,...

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圖5qPCR檢測骨細(xì)胞中Delta-like基因的過表達(dá)對BMSC中Notch信號的影響

圖4qPCR檢測骨細(xì)胞中Delta-like基因的過表達(dá)對BMSC成骨相關(guān)標(biāo)志基因表達(dá)的影響2.5DAPT抑制骨細(xì)胞中Delta-like基因過表達(dá)誘導(dǎo)的BMSC成骨分化

圖6DAPT對骨細(xì)胞Delta-like基因過表達(dá)增強(qiáng)BMSC成骨分化中ALP活性的影響

而圖7顯示,在加入DAPT后MLO-Y4-Dll4組ALP、Runx2、OPN及CollagenⅠ顯著降低(P<0.05),表明Notch經(jīng)典信號在骨細(xì)胞Dll4引起的BMSC成骨分化中起到重要作用。雖然成骨分化被抑制,但與對照組相比,仍然促進(jìn)了ALP的活性及成骨相關(guān)標(biāo)志基因的表....

圖7qPCR檢測DAPT對骨細(xì)胞Delta-like基因過表達(dá)誘導(dǎo)的BMSC成骨分化中標(biāo)志基因表達(dá)量的影響

圖6DAPT對骨細(xì)胞Delta-like基因過表達(dá)增強(qiáng)BMSC成骨分化中ALP活性的影響圖8qPCR檢測DAPT對骨細(xì)胞Delta-like過表達(dá)激活的BMSCNotch信號的影響

圖8qPCR檢測DAPT對骨細(xì)胞Delta-like過表達(dá)激活的BMSCNotch信號的影響

圖7qPCR檢測DAPT對骨細(xì)胞Delta-like基因過表達(dá)誘導(dǎo)的BMSC成骨分化中標(biāo)志基因表達(dá)量的影響2.6DAPT抑制骨細(xì)胞Delta-like基因過表達(dá)激活的BMSC中Notch信號

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