背景:利用干細(xì)胞分化代替受損神經(jīng)元的設(shè)想,已經(jīng)逐漸受到科研工作者的關(guān)注。胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞雖然具有良好的神經(jīng)元分化潛能,但由于接種活體動(dòng)物具有致瘤性,限制了其進(jìn)一步的深入研究。目的:建立穩(wěn)定的羊水干細(xì)胞分選、培養(yǎng)、成神經(jīng)誘導(dǎo)分化體系,探討其作為神經(jīng)元再生種子細(xì)胞的可行性。方法:經(jīng)B超引導(dǎo)下,穿刺獲取孕19-22周期間的羊水樣本10 mL,磁珠分選其中c-Kit陽(yáng)性的羊水干細(xì)胞。免疫熒光染色鑒定羊水干細(xì)胞標(biāo)記物Oct-4、Sox2;RT-PCR檢測(cè)羊水干細(xì)胞多次傳代后干性標(biāo)記物c-Kit、Oct-4、Sox2、Nestin的表達(dá);羊水干細(xì)胞懸滴培養(yǎng)4 d觀察擬胚體的形成情況;采用"兩階段"分步誘導(dǎo)羊水干細(xì)胞向神經(jīng)元方向分化,免疫熒光染色觀察Neuro D、Tuj1的表達(dá)。結(jié)果與結(jié)論:①羊水中可分選出大約1%的c-Kit陽(yáng)性羊水干細(xì)胞;②(75.0±4.6)%的羊水干細(xì)胞表達(dá)Oct-4,(86.0±2.8)%的羊水干細(xì)胞表達(dá)Sox2;③RT-PCR方法檢測(cè)干性標(biāo)記物c-Kit、Oct-4、Sox2、Nestin的表達(dá)量并不隨細(xì)胞傳代數(shù)的增加而改變;④經(jīng)懸滴培養(yǎng)可形成擬胚體并表達(dá)O...

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圖1c-Kit+羊水干細(xì)胞呈成纖維樣細(xì)胞形態(tài)(標(biāo)尺為100μm)

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圖2羊水干細(xì)胞標(biāo)記物Sox2、Oct-4的表達(dá)(標(biāo)尺為50μm)

圖1c-Kit+羊水干細(xì)胞呈成纖維樣細(xì)胞形態(tài)(標(biāo)尺為100μm)圖3RT-PCR檢測(cè)第5代與第30代羊水干細(xì)胞的干細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)量

圖3RT-PCR檢測(cè)第5代與第30代羊水干細(xì)胞的干細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)量

圖2羊水干細(xì)胞標(biāo)記物Sox2、Oct-4的表達(dá)(標(biāo)尺為50μm)圖4羊水干細(xì)胞懸滴培養(yǎng)4d形成類似于胚胎干細(xì)胞的擬胚體

圖4羊水干細(xì)胞懸滴培養(yǎng)4d形成類似于胚胎干細(xì)胞的擬胚體

圖3RT-PCR檢測(cè)第5代與第30代羊水干細(xì)胞的干細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)量圖5免疫熒光鑒定羊水干細(xì)胞Tuj1表達(dá)(標(biāo)尺為100μm)

本文編號(hào)：3978509