背景:利用干細胞分化代替受損神經(jīng)元的設想,已經(jīng)逐漸受到科研工作者的關注。胚胎干細胞和誘導性多能干細胞雖然具有良好的神經(jīng)元分化潛能,但由于接種活體動物具有致瘤性,限制了其進一步的深入研究。目的:建立穩(wěn)定的羊水干細胞分選、培養(yǎng)、成神經(jīng)誘導分化體系,探討其作為神經(jīng)元再生種子細胞的可行性。方法:經(jīng)B超引導下,穿刺獲取孕19-22周期間的羊水樣本10 mL,磁珠分選其中c-Kit陽性的羊水干細胞。免疫熒光染色鑒定羊水干細胞標記物Oct-4、Sox2;RT-PCR檢測羊水干細胞多次傳代后干性標記物c-Kit、Oct-4、Sox2、Nestin的表達;羊水干細胞懸滴培養(yǎng)4 d觀察擬胚體的形成情況;采用"兩階段"分步誘導羊水干細胞向神經(jīng)元方向分化,免疫熒光染色觀察Neuro D、Tuj1的表達。結(jié)果與結(jié)論:①羊水中可分選出大約1%的c-Kit陽性羊水干細胞;②(75.0±4.6)%的羊水干細胞表達Oct-4,(86.0±2.8)%的羊水干細胞表達Sox2;③RT-PCR方法檢測干性標記物c-Kit、Oct-4、Sox2、Nestin的表達量并不隨細胞傳代數(shù)的增加而改變;④經(jīng)懸滴培養(yǎng)可形成擬胚體并表達O...

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圖1c-Kit+羊水干細胞呈成纖維樣細胞形態(tài)(標尺為100μm)

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圖2羊水干細胞標記物Sox2、Oct-4的表達(標尺為50μm)

圖1c-Kit+羊水干細胞呈成纖維樣細胞形態(tài)(標尺為100μm)圖3RT-PCR檢測第5代與第30代羊水干細胞的干細胞標記物表達量

圖3RT-PCR檢測第5代與第30代羊水干細胞的干細胞標記物表達量

圖2羊水干細胞標記物Sox2、Oct-4的表達(標尺為50μm)圖4羊水干細胞懸滴培養(yǎng)4d形成類似于胚胎干細胞的擬胚體

圖4羊水干細胞懸滴培養(yǎng)4d形成類似于胚胎干細胞的擬胚體

圖3RT-PCR檢測第5代與第30代羊水干細胞的干細胞標記物表達量圖5免疫熒光鑒定羊水干細胞Tuj1表達(標尺為100μm)

本文編號：3978509