雄性小鼠減數(shù)分裂啟動(dòng)相關(guān)蛋白譜系的構(gòu)建及初步的功能研究
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【摘要】:減數(shù)分裂是生殖細(xì)胞不同于體細(xì)胞所特有的細(xì)胞分裂方式,在減數(shù)分裂啟動(dòng)過程中有許多基因與蛋白的表達(dá)與之密切相關(guān)。小鼠胚胎原始生殖細(xì)胞PGC遷移到生殖嵴并在此定位以及性別決定基因SRY表達(dá)后,雌性生殖嵴中較高濃度的維甲酸(retinoic acid,RA)誘導(dǎo)生殖細(xì)胞表達(dá)Stra8(stimulated by retinoic acid gene 8),減數(shù)分裂啟動(dòng)并阻滯在第一次減數(shù)分裂前期的雙線期,而雄性生殖細(xì)胞至出生后才開始啟動(dòng)減數(shù)分裂。已知RA是雌性和雄性生殖細(xì)胞減數(shù)分裂啟動(dòng)和正常進(jìn)行的關(guān)鍵。但目前對(duì)于RA信號(hào)通路調(diào)控減數(shù)分裂啟動(dòng)的下游機(jī)制仍存在較大的爭議,至今未形成一個(gè)完整的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。為了全面了解雄性生殖細(xì)胞減數(shù)分裂啟動(dòng)的分子機(jī)制,我們以ICR小鼠為模式動(dòng)物,運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),構(gòu)建了雄性小鼠減數(shù)分裂啟動(dòng)的特定時(shí)間點(diǎn)(PND8.5和PND10.5)的差異蛋白表達(dá)譜,篩選出差異倍數(shù)在1.5倍以上的104個(gè)蛋白,結(jié)合生物信息學(xué)分析這些差異蛋白在減數(shù)分裂啟動(dòng)過程中的作用,挑選出5個(gè)與RA信號(hào)通路密切相關(guān)的候選蛋白,通過Western Blot技術(shù)對(duì)這些蛋白在譜系中的變化趨勢進(jìn)行了驗(yàn)證;進(jìn)一步我們利用定量Real-time PCR的方法,結(jié)合小鼠精原干細(xì)胞體外培養(yǎng)的技術(shù)平臺(tái),研究體外RA誘導(dǎo)后下游候選基因的表達(dá)變化。最后,我們挑選PDCD4(programmed cell death 4)蛋白開展初步功能研究,明確PDCD4在不同時(shí)間點(diǎn)小鼠睪丸組織中的細(xì)胞定位,推測其在精子發(fā)生過程中與精原細(xì)胞的正常分化,順利進(jìn)入減數(shù)分裂階段密切相關(guān)。綜上所述,對(duì)這些差異蛋白的鑒定及其功能分析為研究減數(shù)分裂相關(guān)基因和蛋白對(duì)精子發(fā)生的調(diào)控作用奠定基礎(chǔ),也為臨床治療男性不育提供大量潛在的分子靶標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】:減數(shù)分裂啟動(dòng) 蛋白質(zhì)組學(xué) 小鼠睪丸 維甲酸
【學(xué)位授予單位】:南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:R321
【目錄】:
- 中文摘要4-5
- 英文摘要5-6
- 前言6-8
- 實(shí)驗(yàn)材料與方法8-34
- 1. 實(shí)驗(yàn)材料8-18
- 2. 實(shí)驗(yàn)方法18-34
- 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-48
- 1. 雄性小鼠減數(shù)分裂啟動(dòng)特定時(shí)間點(diǎn)的確定34-35
- 2. 雄性小鼠減數(shù)分裂啟動(dòng)差異蛋白的鑒定35-42
- 3. 運(yùn)用生物信息學(xué)對(duì)差異蛋白功能進(jìn)行分析42-44
- 4. 運(yùn)用Western Blot方法驗(yàn)證差異蛋白在譜系中的表達(dá)趨勢44-45
- 5. 小鼠精原干細(xì)胞體外維甲酸誘導(dǎo)后基因表達(dá)變化45-46
- 6. PDCD4的免疫組織化學(xué)定位分析46-48
- 討論48-52
- 小結(jié)52-53
- 參考文獻(xiàn)53-59
- 綜述59-77
- 參考文獻(xiàn)69-77
- 碩士在讀期間發(fā)表論文77-78
- 致謝78
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本文編號(hào):397128
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