本文關(guān)鍵詞：不同性別腎缺血再灌注損傷模型小鼠MicroRNA的表達(dá)譜分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過觀察不同性別小鼠腎缺血再灌注損傷前后腎臟組織中Micro RNA表達(dá)差異,找出具有顯著差異的Micro RNA,研究Micro RNA在不同性別小鼠腎缺血再灌注損傷中的作用及機(jī)制。方法:BALB/c小鼠隨機(jī)分為4組進(jìn)行不同處理:T1(雄性腎缺血45min再灌注24h組)、T2(雌性腎缺血45min再灌注24h組)、C1(雄性假手術(shù)組)、C2(雌性假手術(shù)組),每組20只。BALB/c小鼠術(shù)前禁食12 h,用10%水合氯醛作為麻醉劑(10 m L/kg),沿腹部正中做一切口,進(jìn)入腹腔,找到腎蒂,用無損傷微型動脈夾迅速阻斷T1、T2組小鼠雙側(cè)腎臟血供,此時可見腎臟在30s內(nèi)由鮮紅變醬紫色,則表示夾閉成功,阻斷45 min后去除動脈夾可見腎臟迅速由醬紫色恢復(fù)原來顏色(鮮紅色),分層縫合關(guān)閉腹腔并滴入1-2ml生理鹽水保持腹腔濕潤[1.]。C1、C2假手術(shù)組找到腎蒂后不阻斷腎蒂血流,術(shù)中應(yīng)用生理鹽水使小鼠保持充分的水化,待45 min后,分層縫合關(guān)閉腹腔術(shù)后將小鼠放置在26度的恒溫房中飼養(yǎng),保持充足的食物和水。術(shù)后小鼠存活24 h表示建模成功。通過Micro RNA基因芯片技術(shù)檢測各組小鼠腎臟Micro RNA表達(dá)量后,對比各組小鼠間Micro RNA表達(dá)量,找出具有顯著差異的Micro RNA;接著采用實(shí)時熒光定量PCR檢測各組中具有顯著差異的Micro RNA表達(dá)量,其結(jié)果是否與Micro RNA芯片相符。結(jié)果:(1)T1(雄性腎缺血45min再灌注24h組)、T2(雌性腎缺血45min再灌注24h組)、C1(雄性假手術(shù)組)、C2(雌性假手術(shù)組),分別為80%、100%、100%、100%。雌性腎缺血再灌注組與與雄性腎缺血再灌注組比較后血清肌酐及血清尿素氮變化具有明顯差異性。而雌性假手術(shù)組與雄性假手術(shù)組血清肌酐及血清尿素氮變化無統(tǒng)計學(xué)意義。(2)C1(雄性IRI 0min組)、C2(雌性IRI 0min組)組中腎組織病理結(jié)構(gòu)基本正常,僅可見局部腎小管上皮水腫及少量變性;T2(雌性IRI 45min組)組顯微鏡下,可見腎小管上皮細(xì)胞壞死、崩解脫落以及細(xì)胞核濃縮、碎裂、核溶解,箭頭所示。部分腎小管管腔擴(kuò)張、管腔輪廓模糊;T1(雄性IRI 45min組)組中仍可見的腎小管上皮細(xì)胞壞死、空泡變性、腎小管刷狀緣扁平以及細(xì)胞核濃縮、碎裂、核溶解。RAbb半定量對模型腎進(jìn)行腎小管病理損傷評分C2(雌性IRI 0min組)、T2(雌性IRI 45min組)、之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05;C1(雄性IRI 0min組)及T1(雄性IRI 45min組)組之間無統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05,如圖2。(3)四組小鼠中Micro RNA的表達(dá)存在明顯差異,在T2(雌性腎缺血45min再灌注24h組)與T1(雄性腎缺血45min再灌注24h組)對比發(fā)現(xiàn)有表達(dá)上調(diào)的Micro RNA有5個;T2(雌性腎缺血45min再灌注24h組)與C2(雌性假手術(shù)組)對比發(fā)現(xiàn)有差異表達(dá)的Micro RNA有29個,其中上調(diào)的有Micro RNA有25個,下調(diào)的Micro RNA有4個;T1(雄性腎缺血45min再灌注24h組)與C1(雄性假手術(shù)組)對比發(fā)現(xiàn)有差異表達(dá)的Micro RNA有38個,其中上調(diào)的Micro RNA有9個,下調(diào)的Micro RNA有29個;C2(雌性假手術(shù)組)與C1(雄性假手術(shù)組)對比發(fā)現(xiàn)有差異表達(dá)的Micro RNA有102個,其中上調(diào)Micro RNA的有22個,下調(diào)的MicroRNA有80個。(4)對比四組BALB/c小鼠腎組織的Micro RNA表達(dá),實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)mir-21及mir-664在各組腎臟組織中的表達(dá)均有著明顯差異性,其中雄性假手術(shù)組與雌性假手術(shù)組相比mir-21和mir-664表達(dá)相近,雄性腎缺血再灌注組與雄性假手術(shù)組相比上調(diào)分別為1.5倍和1.3倍,而雌性腎腎缺血再灌注組與雄性假手術(shù)組相比分別上調(diào)2倍和2.2倍,采用實(shí)時熒光定量PCR檢測mir-21及mir-664的表達(dá)量,其結(jié)果與基因芯片相符。結(jié)論:(1)成功構(gòu)建了BALB/c小鼠血腎缺血再灌注損傷模型;(2)不同性別小鼠對腎缺血再灌注損傷的敏感性及耐受性存在明顯差異;(3)不同性別間小鼠腎腎缺血再灌注損傷后腎組織Micro RNA表達(dá)存在明顯差異,其中mir-21及mir-664的表達(dá)量尤為明顯。
【關(guān)鍵詞】：腎缺血再灌注損傷 MicroRNA基因芯片 Mir-21 Mir-664
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R692;R-332
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英縮略詞表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料與方法12-24
• 2.1 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備及器械12-13
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料13
• 2.3 主要試劑13-14
• 2.4 主要溶液及試劑配制14-16
• 2.4.1 0.1%DEPC14
• 2.4.2 0.5×TBE緩沖液14-15
• 2.4.3 溴化乙錠(EB，，10 mg／m1)溶液15
• 2.4.4 20XSSPE溶液15
• 2.4.5 0.2%SDS溶液15
• 2.4.6 20XSSC溶液15
• 2.4.7 Gene Expression Wash Buffe I15-16
• 2.4.8 Gene Expression Wash Buffe II16
• 2.4.9 Gene Expression Wash Buffe III16
• 2.5 實(shí)驗(yàn)技術(shù)與方法16-24
• 2.5.1 動物飼養(yǎng)16
• 2.5.2 小鼠腎IRI模型構(gòu)建16-17
• 2.5.3 血清肌酐、尿素氮檢測17
• 2.5.4 腎臟病理組織學(xué)檢測17-18
• 2.5.5 Micro RNA芯片檢測18-21
• 2.5.6 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證Micro RNA的準(zhǔn)確性21-23
• 2.5.7 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計23-24
• 第3章 結(jié)果24-31
• 3.1 模型構(gòu)建的評估24-26
• 3.1.1 手術(shù)成功率24
• 3.1.2 小鼠經(jīng)歷不同時間腎缺血再灌注損傷后血清肌酐、尿素氮變化24-25
• 3.1.3 腎組織病理學(xué)評估25-26
• 3.2 Micro RNA芯片結(jié)果26-30
• 3.2.1 RNA完整性檢測26-27
• 3.2.2 Micro RNA芯片篩選結(jié)果27-29
• 3.2.3 mi RNA芯片差異表達(dá)數(shù)據(jù)聚類分析29-30
• 3.3 熒光定量PCR檢測的相關(guān)結(jié)果30-31
• 第4章 討論31-35
• 第5章 結(jié)論35-36
• 致謝36-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果41-42
• 綜述42-48
• 參考文獻(xiàn)46-48

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 盧燕華;唐三元;;miR-217靶向MAPK1抑制胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移作用研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志;2014年11期

2 李安瑩;楊侃;楊瓊;;microRNA-133a在心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌細(xì)胞中的表達(dá)及抗凋亡作用[J];中國動脈硬化雜志;2014年10期

3 胡紅林;王共先;鄒叢;習(xí)小慶;史子敏;;BALB/c小鼠腎缺血再灌注損傷模型的建立與評價[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年05期

4 徐青云;邵鳳民;;性別差異在腎臟缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制[J];實(shí)用診斷與治療雜志;2007年05期

5 劉少青,宋傳明;HSP70在缺血預(yù)處理對大鼠腎缺血再灌注損傷保護(hù)作用中的表達(dá)及意義[J];臨沂醫(yī)專學(xué)報;2000年03期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 徐夏蓮;低氧誘導(dǎo)因子和miR-21在腎臟晚期缺血預(yù)適應(yīng)中作用機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

2 胡紅林;硫酸氫氯吡格雷對腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];南昌大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郭艷芳;雌激素對大鼠腎臟缺血再灌注損傷的影響及對內(nèi)皮型一氧化氮酶表達(dá)的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

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本文編號：395297