目的利用CRISPR/Cas9基因編輯技術建立5型磷酸二酯酶(PDE5)基因敲除小鼠模型并分析小鼠表型,初步探討PDE5基因敲除對小鼠各項生命指標的影響。方法利用CRISPR/Cas9基因編輯技術,通過胚胎顯微注射移植法引導Cas9裂解酶裂解PDE5基因,刪除第2外顯子589個核苷酸構建敲除小鼠模型,鼠尾DNA做聚合酶鏈反應和測序鑒定基因型,將陽性PDE5基因敲除鼠和C57BL/6J背景鼠回交,再次通過鼠尾DNA做聚合酶鏈反應和測序鑒定基因型驗證陽性PDE5敲除鼠并繁育。選擇8只雄性C57BL/6J野生型小鼠及8只雄性PDE5基因敲除純合子小鼠,通過觀察2組小鼠生長發(fā)育情況,利用病理切片和超聲心動圖檢測心臟結構和功能,檢測全血細胞計數(shù)和生化指標,進行開場實驗,分析PDE5基因敲除小鼠的表型。結果 PDE5基因敲除小鼠已成功繁育鑒定,子代基因敲除純合型小鼠無胚胎期致死現(xiàn)象且生長正常,與野生型小鼠相比外觀、生長發(fā)育未見明顯差異。PDE5基因敲除對小鼠的心臟形態(tài)及功能無明顯影響;但基因敲除鼠的血小板計數(shù)、中性粒細胞計數(shù)及百分比均明顯低于野生鼠[(894±74)×109/L比(1 052±15...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 動物
    1.2 方法
        1.2.1 利用CRISPR/Cas9基因編輯技術構建PDE5基因敲除鼠模型
        1.2.2 生長發(fā)育檢測
        1.2.3 病理切片及染色
        1.2.4 超聲心動圖檢測心臟功能
        1.2.5 全血細胞計數(shù)檢測
        1.2.6 生化檢測
        1.2.7 開場實驗檢測小鼠運動能力和焦慮狀態(tài)
    1.3 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 成功建立PDE5全身性基因敲除鼠
    2.2 基因敲除鼠生長發(fā)育情況
    2.3基因敲除鼠心臟結構及功能
    2.4 基因敲除鼠全血細胞計數(shù)檢測
    2.5 基因敲除鼠生化指標
    2.6 基因敲除鼠運動能力
    2.7 基因敲除鼠焦慮狀態(tài)
3 討論



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