目的利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)建立5型磷酸二酯酶(PDE5)基因敲除小鼠模型并分析小鼠表型,初步探討PDE5基因敲除對(duì)小鼠各項(xiàng)生命指標(biāo)的影響。方法利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù),通過(guò)胚胎顯微注射移植法引導(dǎo)Cas9裂解酶裂解PDE5基因,刪除第2外顯子589個(gè)核苷酸構(gòu)建敲除小鼠模型,鼠尾DNA做聚合酶鏈反應(yīng)和測(cè)序鑒定基因型,將陽(yáng)性PDE5基因敲除鼠和C57BL/6J背景鼠回交,再次通過(guò)鼠尾DNA做聚合酶鏈反應(yīng)和測(cè)序鑒定基因型驗(yàn)證陽(yáng)性PDE5敲除鼠并繁育。選擇8只雄性C57BL/6J野生型小鼠及8只雄性PDE5基因敲除純合子小鼠,通過(guò)觀察2組小鼠生長(zhǎng)發(fā)育情況,利用病理切片和超聲心動(dòng)圖檢測(cè)心臟結(jié)構(gòu)和功能,檢測(cè)全血細(xì)胞計(jì)數(shù)和生化指標(biāo),進(jìn)行開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn),分析PDE5基因敲除小鼠的表型。結(jié)果 PDE5基因敲除小鼠已成功繁育鑒定,子代基因敲除純合型小鼠無(wú)胚胎期致死現(xiàn)象且生長(zhǎng)正常,與野生型小鼠相比外觀、生長(zhǎng)發(fā)育未見(jiàn)明顯差異。PDE5基因敲除對(duì)小鼠的心臟形態(tài)及功能無(wú)明顯影響;但基因敲除鼠的血小板計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)及百分比均明顯低于野生鼠[(894±74)×109/L比(1 052±15...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 動(dòng)物
    1.2 方法
        1.2.1 利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)構(gòu)建PDE5基因敲除鼠模型
        1.2.2 生長(zhǎng)發(fā)育檢測(cè)
        1.2.3 病理切片及染色
        1.2.4 超聲心動(dòng)圖檢測(cè)心臟功能
        1.2.5 全血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)
        1.2.6 生化檢測(cè)
        1.2.7 開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠運(yùn)動(dòng)能力和焦慮狀態(tài)
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 成功建立PDE5全身性基因敲除鼠
    2.2 基因敲除鼠生長(zhǎng)發(fā)育情況
    2.3基因敲除鼠心臟結(jié)構(gòu)及功能
    2.4 基因敲除鼠全血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)
    2.5 基因敲除鼠生化指標(biāo)
    2.6 基因敲除鼠運(yùn)動(dòng)能力
    2.7 基因敲除鼠焦慮狀態(tài)
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