目的了解Wnt/β-catenin信號途徑對小鼠單核/巨噬細(xì)胞Raw264.7的分化調(diào)控。方法將細(xì)胞分為4組:陰性對照組(即空Raw264.7組)、實(shí)驗(yàn)對照組(即感染Ad-GFP組)、陽性對照組(即50 ng/mL RANKL誘導(dǎo)組)和實(shí)驗(yàn)組(即感染Ad-β-catenin組)。分別給予上述4組處理因素后常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)3、6和9 d提取細(xì)胞總RNA,熒光定量real-time(RT-PCR)檢測核因子受體(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、組織蛋白酶K(Cathepsin K)及金屬蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表達(dá),再于同樣處理因素培養(yǎng)6 d通過酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色觀察Raw264.7的分化情況;Western blot檢測TRAP、Cathepsin K蛋白的表達(dá)。結(jié)果 RT-PCR檢測Ad-β-catenin組能下調(diào)RANK、TRAP、Cathepsin K和MMP-9 mRNA的表達(dá);TRAP染色顯示50 ng/mL RANKL誘導(dǎo)組能成功誘導(dǎo)Raw264.7成多核細(xì)胞,空白組和Ad-GFP組有個別多核細(xì)胞,Ad-β-catenin組為單核細(xì)胞;Wes...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng), 病毒擴(kuò)增及滴度測定:
        1.2.2 Real-time-PCR檢測Raw264.7
        1.2.3 抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 染色:
        1.2.4 Western blot 檢測:
2 結(jié)果
    2.1 病毒感染效率及細(xì)胞形態(tài)
    2.2 RT-PCR檢測RANK、TRAP、Cathepsin K和MMP-9 mRNA的表達(dá)
    2.3 抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 染色
    2.4 Western blot檢測TRAP和Cathepsin K蛋白的表達(dá)
3 討論



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