發(fā)布時(shí)間：2024-03-17 05:46

　　第一部分NDVHN蛋白頭-莖部連接區(qū)域的結(jié)構(gòu)與功能背景新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是有包膜、不分節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA病毒,屬于副粘病毒科。該病毒科包含許多重要的人和動(dòng)物致病病毒。腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)、麻疹病毒(measles virus,MeV)、副流感病毒(parainfluenza viruses,PIVs)、犬瘟熱病毒(canine distemper virus)、亨德拉病毒(Hendra virus,HeV)和尼帕病毒(Nipah virus,NiV)等是該病毒科的典型代表病毒。在感染靶細(xì)胞時(shí),所有副粘病毒都需要將它們的病毒包膜與其宿主的靶細(xì)胞膜融合。在該過(guò)程中,大多數(shù)副粘病毒通過(guò)吸附蛋白和融合蛋白(fusion protein,F)的協(xié)同作用誘導(dǎo)膜融合發(fā)生。其中吸附蛋白根據(jù)其不同的功能和病毒來(lái)源可分為3類(lèi):血凝素-神經(jīng)氨酸酶(hemagglutinin-neuraminidase,HN)、血凝素蛋白(hemagglutinin,H)和G蛋白。HN蛋白同時(shí)具有受體識(shí)別活性和神經(jīng)氨酸酶活性(neuraminidas...

【文章頁(yè)數(shù)】：164 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２?ＮＤＶ?ＨＮ突變體蛋白ＩＩＦＡ結(jié)果將ＢＨＫ－２１細(xì)胞鋪至２４孔板中，單獨(dú)轉(zhuǎn)染ＮＤＶ野生??型或突變型ＨＮ質(zhì)粒，檢測(cè)所用的第一抗體為兩種ＮＤＶＨＮ的單克隆抗體混合物（１：１００），??第二抗體為ＦＩＴＣ標(biāo)記的山羊抗小鼠ＩｇＧ（ｌ：２００），于熒光顯微鏡下觀察并拍照

?能正常發(fā)揮作用，所以在進(jìn)行表達(dá)檢測(cè)時(shí)均未對(duì)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行破膜處理。??ＩＩＦＡ觀察結(jié)果顯示（圖２），各突變體蛋白均能在細(xì)胞膜上被檢測(cè)到，熒光??顯微鏡下觀察到被綠色熒光標(biāo)記的細(xì)胞。從熒光標(biāo)記的情況來(lái)看，各突變體蛋白??的表達(dá)差異不大。缺失突變體也能被檢測(cè)到。為了對(duì)其表達(dá)效率進(jìn)行....

圖３?ＨＮ突變體蛋白的細(xì)胞表面表達(dá)效率的流式檢測(cè)結(jié)果（Ａ）各突變體的代表性熒光直方??圖

的表達(dá)差異不大。缺失突變體也能被檢測(cè)到。為了對(duì)其表達(dá)效率進(jìn)行量化，通過(guò)??ＦＡＣＳ進(jìn)一步檢測(cè)這些突變體ＨＮ蛋白相對(duì)于野生型ＨＮ蛋白的細(xì)胞表面表達(dá)效??率（圖３）。圖３Ａ為ｗｔ及突變體ＨＮ蛋白的代表性的熒光直方圖。圖３Ｂ為對(duì)各??蛋白的細(xì)胞表面表達(dá)效率進(jìn)行定量的結(jié)果，表示為各突變體....

圖４?ＮＤＶ?ＨＮ突變蛋白合胞體形成情況在共同表達(dá)ｗｔ或突變的ＨＮ蛋白和Ｆ的單層細(xì)胞??上觀察合胞體形成情況

將ＮＤＶ?ｗｔ或突變體ＨＮ蛋ｆｔ與其同源Ｆ蛋白在ＢＨＫ－２１細(xì)胞屮共同表達(dá)。??將轉(zhuǎn)染ＮＤＶ?ｗｔ?Ｆ質(zhì)粒和空載體的細(xì)胞用作陰性對(duì)照。轉(zhuǎn)染后２４ｈ進(jìn)行固定染色，??于倒置顯微鏡Ｋ觀察多核巨細(xì)胞，即合胞體的形成情況。如圖４所示，與ＮＤＶ?ｗｔ??ＨＮ和Ｆ蛋白相比，這些突變體在與其同....

圖５?ＮＤＶ?ＨＮ突變體蛋白促細(xì)胞融合活性的定量檢測(cè)（內(nèi)容物混合程度）用ｐ－半乳糖苷酶??活性測(cè)量突變體ＨＮ蛋白與其同源Ｆ蛋白導(dǎo)致的內(nèi)容物混合情況

感染重組痘苗病毒后共同表達(dá)Ｆ蛋白和野生型或突變型ＨＮ蛋白的ＢＨＫ－２１細(xì)胞，??另一群是感染野生型痘苗病毒后單獨(dú)轉(zhuǎn)染ｐＧｌＮＴ７Ｐ－Ｇａｌ質(zhì)粒的ＢＨＫ－２１細(xì)胞。??定量結(jié)果顯示（圖５?），合胞體形成能力出現(xiàn)減弱的突變體Ｃｈｉ?ｈＰＩＶｌ、Ｃｈｉ＿ｈＰＩＶ２、??Ｃｈｉ＿ＰＩＶ５....

本文編號(hào)：3930601