目的:制備抗曲霉菌半乳甘露聚糖的單克隆抗體,并基于獲得的抗體建立用于快速準(zhǔn)確檢測曲霉菌感染的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),以期可用于侵襲性曲霉菌病的臨床診斷。方法:提取曲霉菌半乳甘露聚糖后免疫BALB/c小鼠,篩選與制備抗曲霉菌半乳甘露聚糖的單克隆抗體,通過間接ELISA法與Western Blot方法開展單克隆抗體檢測性能分析,使用獲得的單克隆抗體建立雙抗體夾心ELISA方法,并初步應(yīng)用于曲霉菌感染血清檢測。結(jié)果:獲得抗曲霉菌半乳甘露聚糖單克隆抗體5株,均可特異性識別曲霉菌半乳甘露聚糖,以其中性能最佳的3C9抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的3C9抗體配對為基礎(chǔ),建立了雙抗體夾心ELISA方法,通過初步評價確定該方法可應(yīng)用于臨床侵襲性曲霉菌病血清檢測,并且該方法與現(xiàn)有商品化試劑盒相比檢測背景值較低,可更有效區(qū)分曲霉菌感染陰陽性血清。結(jié)論:本研究篩選獲得針對曲霉菌半乳甘露聚糖的特異性單克隆抗體,以該抗體為基礎(chǔ)建立雙抗體夾心ELISA方法具有潛在轉(zhuǎn)化應(yīng)用前景,可為侵襲性曲霉菌病的臨床診斷提供支持。

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【部分圖文】：

圖1抗GM單克隆抗體評價

本研究提取曲霉菌GM作為抗原免疫BALB/c小鼠，通過雜交瘤技術(shù)和間接ELISA法篩選獲得5株可分泌針對曲霉菌GM的單克隆抗體。ELISA檢測結(jié)果如圖1A所示，所有單抗對陰性對照（生理鹽水）無反應(yīng)，但與提取的GM都有較好的特異性反應(yīng)，且抗體效價達(dá)105到106。使用小鼠單克隆抗體....

圖2基于抗GM單克隆抗體建立針對曲霉菌的ELISA檢測方法

侵襲性曲霉菌病診斷的"金標(biāo)準(zhǔn)"是組織標(biāo)本內(nèi)的病原菌培養(yǎng)或組織病理學(xué)，但是由于病人通常是免疫受損且伴有各類血細(xì)胞減少，組織活檢可能存在風(fēng)險，因此該項檢查在臨床上通常不能及時實施或者不能對該病做出及時識別。近年來研究發(fā)現(xiàn)，病人血清內(nèi)曲霉菌GM抗原含量的檢測對侵襲性曲霉菌病的早期診斷具....

圖3建立的GM-ELISA方法可區(qū)分曲霉菌臨床陽性和陰性血清

圖2基于抗GM單克隆抗體建立針對曲霉菌的ELISA檢測方法本研究嘗試基于曲霉菌細(xì)胞壁GM單克隆篩選與ELISA方法，建立高靈敏度、高特異性的曲霉菌GM的檢測試劑。首先,本研究制備了曲霉菌GM的單克隆抗體，篩選出5株抗曲霉菌GM的單抗并且進(jìn)行配對，結(jié)果獲得具有較好反應(yīng)性與特異性的....

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