白念珠菌作為條件致病菌寄生在健康人體的口腔和小腸粘膜中,當機體免疫力低下時,其可侵入機體引發(fā)系統(tǒng)性感染。系統(tǒng)性白念珠菌感染是最常見的院內(nèi)真菌感染,包括念珠菌血癥和深部組織感染。系統(tǒng)性白念珠菌感染患者死亡率較高,即使接受藥物治療,死亡率仍可高達40%。因此,在治療過程中,改善患者的機體免疫力被認為是增強治療效果的理想手段。入侵機體后,白念珠菌表面的病原相關(guān)分子模式被免疫細胞中表達的模式識別受體識別后激起機體的免疫反應(yīng)。目前研究已發(fā)現(xiàn)多種識別白念珠菌的模式識別受體,如Toll樣受體,C型凝集素受體等。白念珠菌表面的β葡聚糖和甘露糖能夠分別結(jié)合C型凝集素受體Dectin-1和Dectin-2,激活磷脂酶Cγ(PLCγ),產(chǎn)生(1,4,5)-三磷酸肌醇(inositol 1,4,5-trisphosphate,InsP₃)。InsP₃結(jié)合InsP3R(InsP₃R)引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中鈣離子的釋放,使胞內(nèi)鈣離子濃度升高。細胞內(nèi)鈣離子調(diào)控多種細胞免疫功能,如活性氧的產(chǎn)生,細胞因子分泌和吞噬等。本課題從酵母雙雜交實驗篩選到SEC5蛋白能夠結(jié)...

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
前言
    參考文獻
第一部分 SEC5與InsP₃R相互作用
    1.1 前言
    1.2 材料與方法
        1.2.1 實驗主要材料
        1.2.2 主要實驗方法
    1.3 實驗結(jié)果
        1.3.1 酵母雙雜交結(jié)果驗證
        1.3.2 SEC5蛋白與InsP₃R細胞內(nèi)免疫熒光共定位
        1.3.3 SEC5蛋白與InsP₃R細胞內(nèi)FRET實驗
        1.3.4 InsP₃R結(jié)構(gòu)中與SEC5相互作用區(qū)域的研究
        1.3.5 SEC5結(jié)構(gòu)中與InsP₃R相互作用區(qū)域的研究
    1.4 小結(jié)
    參考文獻
第二部分 SEC5-InsP₃R相互作用影響InsP₃R離子通道活性
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗主要材料
        2.2.2 主要實驗方法
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 .HEK293細胞Crynkiewicz常數(shù)測定。
        2.3.2 SEC5表達水平對InsP₃R介導的細胞內(nèi)鈣離子釋放的影響
        2.3.3 SEC5與InsP₃R相互作用影響InsP₃R介導的鈣離子釋放
        2.3.4 SEC5結(jié)合InsP₃R影響InsP₃R離子通道活性
    2.4 小結(jié)
    參考文獻
第三部分 SEC5蛋白與InsP₃R相互作用影響巨噬細胞對白念珠菌的吞噬
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實驗主要材料
        3.2.2 主要實驗方法
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 BMDM細胞吞噬起始階段細胞內(nèi)鈣離子濃度升高
        3.3.2 InsP₃R介導的鈣離子釋放影響巨噬細胞對白念珠菌的吞噬作用
        3.3.3 SEC5蛋白影響巨噬細胞對白念珠菌的吞噬作用
        3.3.4 SEC5蛋白與InsP₃R在吞噬小體上共定位
        3.3.5 白念珠菌刺激促進SEC5與InsP₃R蛋白結(jié)合
        3.3.6 干擾SEC5與InsP₃R的相互作用抑制BMDM細胞對白念珠菌的吞噬
        3.3.7 體內(nèi)干擾SEC5與InsP₃R的相互作用影響白念珠菌清除
    3.4 小結(jié)
    參考文獻
第四部分 SEC5與InsP₃R相互作用調(diào)控TBK1-IRF3通路介導抗白念珠菌天然免疫反應(yīng)
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實驗主要材料
        4.2.2 主要實驗方法
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 SEC5穩(wěn)定低表達的RAW264.7細胞株建立
        4.3.2 SEC5蛋白調(diào)控白念珠菌引起的TBK1-IRF3信號通路的激活
        4.3.3 白念珠菌刺激促進InsP₃R-SEC5-TBK1復合體形成
        4.3.4 H1多肽促進SEC5蛋白與TBK1結(jié)合,促進TBK1酶活
        4.3.5 SEC5-RBD與InsP₃R-H1競爭結(jié)合SEC5-2段
    4.4 小結(jié)
    參考文獻
總結(jié)
綜述
    參考文獻
在校期間論文情況
致謝



本文編號：3922719