目的:探討在不同鈣離子濃度下電壓門控鈉離子通道(Na_V)1.2與鈣調(diào)蛋白(CaM)的結(jié)合,并分析CaM的鈣離子結(jié)合位點(diǎn)突變后與Na_V1.2結(jié)合能力的變化。方法:應(yīng)用PCR技術(shù)構(gòu)建Na_V1.2蛋白片段異亮氨酸-谷胺酰胺(IQ)基序的cDNA,采用QIAGEN點(diǎn)突變技術(shù)構(gòu)建CaM突變體(CaM₁₂、CaM₃₄、CaM₁₂₃₄),應(yīng)用牽出(pull-down)試驗(yàn)技術(shù)檢測有鈣(100 nmol/L鈣離子濃度)和無鈣條件下Na_V1.2 IQ與CaM及其突變體(CaM₁₂、CaM₃₄、CaM₁₂₃₄)的結(jié)合情況。結(jié)果:CaM與Na_V1.2 IQ在無鈣和有鈣情況下均可互相結(jié)合,而單獨(dú)重組谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)不具有與CaM結(jié)合的能力。無鈣條件下CaM與Na_V1.2 IQ的結(jié)合量大于有鈣條件下兩者的結(jié)合量(P<0.05);無鈣...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材 料
    1.2 cDNA構(gòu)建和基因突變
    1.3 重組谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)融合蛋白的表達(dá)和純化
    1.4 牽出(pull-down)試驗(yàn)檢測CaM與GST-IQ結(jié)合量
    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié) 果
    2.1 CaM與NaV1.2 IQ的結(jié)合能力
    2.2 鈣離子濃度對CaM與NaV1.2 IQ結(jié)合的影響
    2.3 CaM突變體與NaV1.2 IQ的結(jié)合能力
3 討 論



本文編號：3909096