目的:在C57BL/6遺傳背景下的野生型以及瞬時(shí)受體電位通道A1(transient receptor potential cation channel,subfamily A,member 1,TRPA1)基因敲除小鼠上建立2,4-二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,DNCB)誘導(dǎo)的特應(yīng)性皮炎(atopic dermatitis,AD)模型,初步探索TRPA1在該模型的作用。方法:首先將野生雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組(n=6),對(duì)照組(n=6),建立AD模型。具體造模方案:在致敏階段,于第1天小鼠背部及耳部分別使用2%DNCB(丙酮/橄欖油3∶1)溶液及單純丙酮/橄欖油溶液外涂。在激發(fā)階段,于第5、8、11、14、17、20天背部及耳部分別外涂0.5%DNCB溶液及單純丙酮/橄欖油溶液,共6次,造模后取皮損行HE染色,鑒定AD模型。通過qRT-PCR和Western blot檢測(cè)背部皮損TRPA1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平,免疫組化檢測(cè)TRPA1蛋白的定位及表達(dá)水平。然后隨機(jī)選取6只TRPA1+/+(野生型)小鼠為模型組I,6只TRPA1-/-(敲...

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圖4不同組別小鼠皮炎癥狀評(píng)分和耳部厚度動(dòng)態(tài)變化

經(jīng)反復(fù)接觸致敏后，對(duì)照組小鼠皮膚表現(xiàn)正常，模型Ⅰ、Ⅱ組小鼠皮膚可見不同程度的水腫、紅斑、脫屑、結(jié)痂等炎癥反應(yīng)。皮損動(dòng)態(tài)評(píng)分顯示，模型Ⅱ組低于模型Ⅰ組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(圖4A)。小鼠耳部經(jīng)反復(fù)接觸致敏后，對(duì)照組小鼠耳部腫脹程度沒有明顯變化，模型Ⅰ、Ⅱ組小鼠耳部腫脹程度逐漸加重，模型....

圖5不同組別小鼠背部、耳部皮損組織HE變化（40×）

對(duì)照組正常，未見炎癥反應(yīng)，模型Ⅰ、Ⅱ組小鼠背部或耳部皮膚可見角化過度和(或)角化不全、棘細(xì)胞層增厚、棘細(xì)胞部分細(xì)胞間水腫、細(xì)胞內(nèi)水腫、真皮淋巴細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，且與模型Ⅰ相比較，模型Ⅱ組棘細(xì)胞層的肥厚程度及炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)程度明顯輕于模型Ⅰ組，如圖5所示。2.2.3肥大細(xì)胞....

圖6不同組別小鼠對(duì)照組與模型組背部皮損肥大細(xì)胞染色

經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色后，通過計(jì)數(shù)平均肥大細(xì)胞數(shù)目發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組(3.83±0.75)/視野，模型組Ⅰ組(20.50±1.64)/視野和模型Ⅱ組(11.00±1.55)/視野明顯增加真皮肥大細(xì)胞數(shù)目，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=22.59,P=0.000;t=6.95,P=0.000)(圖6A)....

圖7qRT-PCR檢測(cè)不同組別皮膚組織白介素-4、白介素-13、γ干擾素的相對(duì)表達(dá)

qRT-PCR檢測(cè)皮膚組織相應(yīng)炎癥因子結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比較，模型Ⅰ、Ⅱ組TH2細(xì)胞因子(白介素-4、白介素-13)相對(duì)表達(dá)水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而TH1細(xì)胞因子(γ干擾素)相對(duì)表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型Ⅰ組相比較，模型Ⅱ組TH2細(xì)胞因子(白介素-4、白介素-1....

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