目的合成IL-6的編碼基因,并在大腸桿菌中表達,獲得純化的融合蛋白IL-6。方法采用基于PAS(PCR-based accurate synthesis)的方法,設計全長拼接引物,合成基因IL-6,并將其插入載體pCzn1,獲得的重組質粒pCzn1-IL-6,化學法將其轉化入大腸桿菌TOP10進行克隆。將克隆得到的陽性克隆子轉化入大腸桿菌Arctic Express后用IPTG誘導劑誘導融合蛋白的表達,SDS-PAGE和Western Blot鑒定蛋白表達效果。結果經(jīng)測序和雙酶切驗證,正確構建了重組質粒pCzn1-IL-6,重組質粒成功轉入表達菌株,IL-6原核蛋白在表達菌株中以包涵體和可溶性形式穩(wěn)定表達,通過Ni柱親和純化獲得純化的目標蛋白。結論 IL-6原核蛋白在大腸桿菌中成功表達,為進一步的應用研究打下基礎。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 質粒與菌株
        1.1.2 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 IL-6基因合成
        1.2.2 重組質粒pCzn1-IL-6構建
        1.2.3 質粒酶切鑒定
        1.2.4 原核蛋白的誘導表達及鑒定
        1.2.5 原核蛋白的Ni柱親和純化及結果分析
2 結 果
    2.1 pCzn1-IL-6測序驗證
    2.2 質粒酶切鑒定
    2.3 原核蛋白的誘導表達及鑒定
    2.4 原核蛋白Ni柱純化及結果分析
    2.5 Western Blot結果分析
3 討 論



本文編號：3905405