目的合成IL-6的編碼基因,并在大腸桿菌中表達(dá),獲得純化的融合蛋白IL-6。方法采用基于PAS(PCR-based accurate synthesis)的方法,設(shè)計(jì)全長(zhǎng)拼接引物,合成基因IL-6,并將其插入載體pCzn1,獲得的重組質(zhì)粒pCzn1-IL-6,化學(xué)法將其轉(zhuǎn)化入大腸桿菌TOP10進(jìn)行克隆。將克隆得到的陽性克隆子轉(zhuǎn)化入大腸桿菌Arctic Express后用IPTG誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)融合蛋白的表達(dá),SDS-PAGE和Western Blot鑒定蛋白表達(dá)效果。結(jié)果經(jīng)測(cè)序和雙酶切驗(yàn)證,正確構(gòu)建了重組質(zhì)粒pCzn1-IL-6,重組質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)入表達(dá)菌株,IL-6原核蛋白在表達(dá)菌株中以包涵體和可溶性形式穩(wěn)定表達(dá),通過Ni柱親和純化獲得純化的目標(biāo)蛋白。結(jié)論 IL-6原核蛋白在大腸桿菌中成功表達(dá),為進(jìn)一步的應(yīng)用研究打下基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 質(zhì)粒與菌株
        1.1.2 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 IL-6基因合成
        1.2.2 重組質(zhì)粒pCzn1-IL-6構(gòu)建
        1.2.3 質(zhì)粒酶切鑒定
        1.2.4 原核蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及鑒定
        1.2.5 原核蛋白的Ni柱親和純化及結(jié)果分析
2 結(jié) 果
    2.1 pCzn1-IL-6測(cè)序驗(yàn)證
    2.2 質(zhì)粒酶切鑒定
    2.3 原核蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及鑒定
    2.4 原核蛋白Ni柱純化及結(jié)果分析
    2.5 Western Blot結(jié)果分析
3 討 論



本文編號(hào)：3905405