研究背景和目的:黑色素瘤,又稱惡性黑色素瘤,是一種常見且惡性程度很高的皮膚腫瘤。由于臨床上尚缺乏有效的藥物或治療方法,因此開發(fā)新的靶向藥物已成為熱點(diǎn)。巨噬細(xì)胞遷移抑制因子(MIF)是一種多功能細(xì)胞因子,在炎癥和免疫反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。臨床研究發(fā)現(xiàn),MIF在許多癌癥的多個階段都高表達(dá),提示其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。然而,針對MIF為靶標(biāo)的新藥研發(fā)卻不是很理想。CD74是MIF的胞膜受體,但有研究發(fā)現(xiàn),抑制CD74產(chǎn)生的抑癌效果明顯強(qiáng)于單基因敲減MIF,提示CD74可能存在第二配體。D-多巴色素互變異構(gòu)酶(D-DT)為MIF的唯一同系物,這也提示MIF和D-DT兩者之間在功能上可能存在相互協(xié)同關(guān)系。我們的預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在黑色素瘤細(xì)胞B16中,D-DT和MIF均呈高表達(dá)。本課題將利用單基因或雙基因敲減MIF和D-DT基因的黑色素瘤細(xì)胞B16細(xì)胞及荷瘤小鼠模型,觀察它們對腫瘤增殖抑制程度的影響,以推測是否存在協(xié)同作用,并試圖闡明其可能的分子機(jī)制,從而為臨床上尋找有效治療黑色素瘤的分子靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法:1.構(gòu)建MIF和D-DT單基因或雙基因敲減的黑色素瘤B16穩(wěn)定細(xì)胞系:將分別含有B1...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖3.1五種不同腫瘤細(xì)胞中MIF和D-DT的表達(dá)

且在B16細(xì)胞中皆高表達(dá)，而在4T1細(xì)胞中D-DT表達(dá)相對較少（圖3.1A）。MIF和D-DT屬于同一個蛋白家族，且都位于同一個染色體上。在人類D-DT和MIF的mRNA中它們有50％的同源性，在蛋白水平上有34%的同源性。在小鼠中，D-DT和....

圖3.2shRNA慢病毒液對B16細(xì)胞中MIF和D-DT的敲減效果檢測

第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果高，再選擇這兩條shRNA病毒液構(gòu)建B16shRNA-CONT、B16shRNA-MIF、B16shRNA-D-DT、B16shRNA-MIF/D-DT四種細(xì)胞系，即對照組、MIF單敲組、D-DT單敲組、MIF/D-DT雙敲組。通過Weste....

圖3.3MIF和D-DT雙基因敲減對B16荷瘤鼠的腫瘤生長影響

22圖3.3MIF和D-DT雙基因敲減對B16荷瘤鼠的腫瘤生長影響。A圖為C57BL/6雌鼠（n=6）分別接種3×104個B16shRNA-CONT、B16shRNA-MIF、B16shRNA-D-DT、B16shRNA-MIF/D-DT四種細(xì)胞，....

圖3.5雙基因敲減MIF和DDT對B16細(xì)胞的增殖活性和克隆形成集落能力的影響

3.5雙基因敲減MIF和DDT對B16細(xì)胞的增殖活性和克隆形成集落能力的影響。A圖CCK8檢測B16shRNA-CONT、B16shRNA-MIF、B16shRNA-D-DT、B16shRNA-MIF/D-四種細(xì)胞系在24h，48h，72h三個時....

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