鉤端螺旋體病是由致病性鉤端螺旋體引起的一種人獸共患病,為世界上流行最廣泛的人獸共患傳染病之一,其嚴(yán)重病例可發(fā)展至多器官衰竭、甚至死亡。目前,對(duì)鉤端螺旋體的分類方法主要包括傳統(tǒng)的血清學(xué)方法和基因分子分型方法。經(jīng)典的血清學(xué)分類法在過去幾十年應(yīng)用較為廣泛,但使用血清均為多克隆抗體,在不同鉤端螺旋體血清群或型之間存在一定的交叉反應(yīng)。隨著生物技術(shù)的發(fā)展,各種分子分型方法被應(yīng)用于各國鉤端螺旋體病的流行病學(xué)研究。本研究應(yīng)用16S rRNA、多位點(diǎn)序列分析(MLST)和脈沖場凝膠電泳(PFGE)方法對(duì)中國食品藥品檢定研究院鉤端螺旋體專業(yè)實(shí)驗(yàn)室保存的73株國內(nèi)菌株和63株國外菌株進(jìn)行了分子分型。研究結(jié)果表明,應(yīng)用16S rRNA基因序列分析技術(shù)對(duì)各種血清群菌株進(jìn)行基因種分析,共鑒定出85株致病性鉤端螺旋體,分別屬于8個(gè)不同的鉤端螺旋體基因種屬；應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)對(duì)鉤端螺旋體的7個(gè)管家基因擴(kuò)增、測序,進(jìn)行多位點(diǎn)序列分析(MLST),得出了各致病性菌株的基因型(STs),并發(fā)現(xiàn)了47種新的MLST基因型,其中32種來自中國,表明中國鉤端螺旋體分子流行趨勢與其他國家有所不同；利用限制性內(nèi)切酶Not ...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 鉤端螺旋體簡介
        1.1.2 鉤端螺旋體形態(tài)及活性
        1.1.3 鉤端螺旋體基因組特點(diǎn)
        1.1.4 鉤端螺旋體流行病學(xué)
    1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢
        1.2.1 血清學(xué)分類
        1.2.2 基因分類
    1.3 本研究擬解決的關(guān)鍵問題及創(chuàng)新點(diǎn)、理論意義及應(yīng)用價(jià)值
第二章 鉤端螺旋體基因種鑒定
    2.1 材料與設(shè)備
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        2.1.2 設(shè)備
        2.1.3 耗材
        2.1.4 試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 鉤端螺旋體的培養(yǎng)
        2.2.2 鉤端螺旋體DNA提取
        2.2.3 16S rRNA和SecY基因擴(kuò)增
        2.2.4 通用引物擴(kuò)增16S rRNA基因測序
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 電泳結(jié)果
        2.3.2 通用引物擴(kuò)增的16S rRNA基因產(chǎn)物的測序分析結(jié)果
    2.4 討論
第三章 多位點(diǎn)序列分析
    3.1 材料與設(shè)備
        3.1.1 菌株
        3.1.2 儀器設(shè)備
        3.1.3 耗材
        3.1.4 試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 PCR反應(yīng)體系
        3.2.2 反應(yīng)條件
        3.2.3 電泳
    3.3 MLST實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 討論
第四章 脈沖場凝膠電泳分析
    4.1 材料與設(shè)備
        4.1.1 菌株
        4.1.2 儀器與試劑
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 培養(yǎng)基及其它試劑配制
    4.2 PFGE實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 菌體收集與膠塊制備
        4.2.2 細(xì)菌裂解
        4.2.3 基因組總DNA的酶切
        4.2.4 脈沖場電泳和染色
        4.2.5 聚類分析
    4.3 PFGE分析結(jié)果
        4.3.1 PFGE電泳結(jié)果圖
        4.3.2 脈沖場凝膠電泳分型結(jié)果聚類分析
    4.4 討論
第五章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡介
攻讀碩士學(xué)位期間研究成果



本文編號(hào)：3857161