發(fā)布時間：2023-09-14 05:48

　　目的克隆鮑曼不動桿菌二硫鍵形成蛋白C(DsbC)基因,制備重組DsbC蛋白,為研究其活性奠定基礎。方法通過NCBI獲得DsbC蛋白序列,分析其生物學性質。采用PCR方法擴增無信號肽DsbC基因,并將其連接到表達質粒pET28a,構建重組質粒pET28a-DsbC,轉化大腸埃希菌BL21(DE3)后用IPTG誘導DsbC蛋白的表達,采用鎳離子親和層析法純化目的蛋白。結果 DsbC具有一個信號肽,由2個相同的DsbC蛋白分子構成二聚體。PCR擴增去掉信號肽的DsbC基因大小為636bp,構建的重組質粒pET28a-DsbC經PCR測序驗證正確。重組質粒轉化DE3后經IPTG誘導,表達分子質量單位為26.1×10³的DsbC蛋白,經鎳柱純化得到單一電泳條帶的重組蛋白。結論使用基因工程的方法表達并經鎳柱層析得到高純度的鮑曼不動桿菌DsbC蛋白,為進一步研究其活性奠定了基礎。

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        1.1 菌株和質粒
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 鮑曼不動桿菌DsbC蛋白的生物信息學分析
        2.2 DsbC基因的PCR擴增
        2.3 重組質粒的構建
        2.4 重組DsbC蛋白的表達與純化
結果
    1 DsbC蛋白的生物信息學分析
    2重組質粒pET28a-DsbC的構建及鑒定
    3 重組DsbC蛋白在大腸埃希菌中的表達與純化
討論



本文編號：3846675