目的建立嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2(SARS-CoV-2)假病毒(SARS-CoV-2 pps)的制備方法。方法設計、合成序列優(yōu)化的SARS-CoV-2刺突蛋白(S)基因,構建表達質粒,轉染293T細胞,用免疫熒光檢測S蛋白的表達;將該質粒與基于慢病毒基因骨架的含增強綠色熒光蛋白(EGFP)報告基因的假病毒包裝質粒共轉染293T細胞,收集細胞培養(yǎng)上清,感染Vero E6和Huh7細胞,觀察細胞內EGFP的表達;將制備的SARS-CoV-2 pps感染Vero E6細胞,檢測膜融合抑制劑氯喹和鹽酸阿比朵爾、SARS-CoV-2 S1蛋白單克隆抗體及新型冠狀病毒肺炎患者恢復期血清對假病毒感染性的影響。結果構建的SARS-CoV-2 S質粒轉染的293T細胞可與S1蛋白單克隆抗體及新型冠狀病毒肺炎患者恢復期血清反應。SARS-CoV-2 S質粒與HIV假病毒包裝質粒共轉染293T細胞的上清加入Vero E6細胞和Huh7細胞36 h和72 h后可分別觀察到細胞內表達的EGFP,EGFP陽性的Huh7細胞數(shù)量明顯多于Vero E6細胞。2種膜融合抑制劑、1株人源S1單克隆抗體及2份新型冠狀病...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 質粒載體、細胞、試劑
    1.2 SARS-CoV-2 S基因設計、合成與表達質粒構建
    1.3 SARS-CoV-2 S基因表達產物鑒定
    1.4 假病毒制備與感染性檢測
    1.5 檢測膜融合抑制劑和S抗體對SARS-CoV-2 pps感染的影響
    1.6 統(tǒng)計學處理
2 結 果
    2.1 SARS-CoV-2 S蛋白在293T細胞中的表達鑒定
    2.2 SARS-CoV-2 pps感染靶細胞的鑒定
    2.3 2種膜融合抑制劑對SARS-CoV-2 pps感染的影響
    2.4 S1單克隆抗體及COVID-19患者恢復期血清對SARS-CoV-2 pps感染的影響
3 討 論



本文編號：3846043