目的:分離并鑒定C57BL/6小鼠肺組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)線粒體結(jié)構(gòu)偶聯(lián)(ERMC)。方法:選取8～10周C57BL/6雄性小鼠10只,處死小鼠后,取1 g肺組織勻漿后,采用梯度離心法分別分離出肺組織細胞內(nèi)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、粗提線粒體、ERMC和純化線粒體,然后采用Western blotting方法對上述結(jié)構(gòu)進行鑒定。結(jié)果:通過梯度離心在離心管中間一層白色條帶中含有ERMC,底層白色沉淀物為純化的線粒體,隨后將分離純化的ERMC和其他組分進行鑒別,結(jié)果發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)主要表達在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和ERMC,Cyto C主要分布在線粒體,而鈣連蛋白主要表達在內(nèi)質(zhì)網(wǎng),三磷酸肌醇受體-Ⅰ(IP3R-1)作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的鈣離子通道,在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和ERMC均有表達,此外,Sigma-1受體分子伴侶(Sig-1R)多表達在ERMC和線粒體中。結(jié)論:上述特征性蛋白分子表達分布特點說明本次研究分離提純肺組織內(nèi)ERMC的方法有效,可將其應(yīng)用于后續(xù)的實驗。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗動物
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 小鼠肺組織內(nèi)ERMC的分離過程
        1.3.1 組織提取
        1.3.2 ERMC的純化
    1.4 鑒定提取分離的ERMC
    1.5 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
3 討論



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