巴泰病毒(Batai virus,BATV)是一種人獸共患病毒,近年在全球廣泛流行。我國也有人和動物感染的相關(guān)報道,而目前對BATV的研究僅局限于分子檢測和全基因測序,還沒有關(guān)于BATV單克隆抗體的相關(guān)研究,但制備特異性強(qiáng)、活性好的單克隆抗體也是防控BATV的關(guān)鍵。為了制備BATV單克隆抗體,本研究利用純化的BATV作為抗原免疫雌性BALB/c小鼠,制備鼠源單克隆抗體。通過免疫小鼠后斷尾取血,間接ELISA測其血清效價后,將SP2/0細(xì)胞與小鼠的脾細(xì)胞融合。ELISA方法篩選陽性細(xì)胞株,并進(jìn)行亞克隆后制備單抗腹水,并利用辛酸-硫酸銨沉淀法純化腹水。結(jié)果獲得7株單克隆抗體,包括5株IgG型和2株IgM型。其中制備的3E2單克隆抗體效價最高為1∶32 000。經(jīng)間接ELISA、間接免疫熒光和Western Blot檢測表明,制備的3E2單抗具有較好的純度、活性和特異性,為BATV快速檢測方法的建立及致病機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        1.2 抗原和細(xì)胞系
        1.3 主要試劑及儀器
    2 病毒純化
    3 單抗篩選方法（間接ELISA）的建立
    4 雜交瘤細(xì)胞的制備與篩選
        4.1 免疫雌性BALB/c小鼠
        4.2 細(xì)胞融合
        4.3 雜交瘤細(xì)胞的篩選
    5 單克隆抗體亞型的鑒定
    6 單克隆抗體小鼠腹水制備及效價檢測
    7 特異性鑒定
    8 單克隆抗體的鑒定
        8.1 間接免疫熒光鑒定
        8.2 蛋白質(zhì)印跡（Western Blot）鑒定
結(jié)果
    1 BATV的培養(yǎng)及純化
    2免疫BALB/c小鼠效價的檢測
    3單克隆抗體的篩選
    4單克隆抗體亞型分類
    5小鼠腹水單克隆抗體效價測定
    6單克隆抗體的特異性鑒定
    7單克隆抗體的IFA鑒定
    8單克隆抗體Western Blot鑒定
討論



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