目的:髓源抑制性細胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)對多種免疫細胞如T細胞、NK細胞等的作用已有明確報道,但關(guān)于MDSC對B細胞的影響及機制尚未闡明。因此,探討荷乳腺癌小鼠MDSC對B細胞功能的影響可有助于更全面地認識MDSC對免疫應(yīng)答多細胞網(wǎng)絡(luò)的負向調(diào)控功能,并使研究者對B細胞的免疫抑制有了更深刻的理解,為探索腫瘤、自身免疫耐受和自身免疫性疾病等的發(fā)生發(fā)展機制及免疫治療的應(yīng)用提供了新的研究途徑。方法:構(gòu)建BALB/c小鼠4T1乳腺癌模型,磁珠分選出腫瘤小鼠脾臟的MDSC與正常小鼠脾臟的B細胞,將MDSC與B細胞共孵育;流式細胞術(shù)檢測MDSC對B細胞表面分子PD-1、PD-L1、CTLA-4、CCR6、CD62L和MHCⅡ的表達影響;ELISA法檢測B細胞分泌的IgA、IgM和IgG的變化;BrdU試劑盒檢測B細胞增殖情況;AnnexinⅤ/PI凋亡試劑盒檢測B細胞凋亡。磁珠分選出共孵育體系中的B細胞,將其與T細胞共孵育,BrdU試劑盒檢測T細胞增殖情況,AnnexinⅤ/PI凋亡試劑盒檢測T細胞凋亡,流式細胞術(shù)檢測T細胞分泌IFN-γ的情況...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
1 對象和方法
    1.1 研究材料
        1.1.1 研究試劑
        1.1.2 研究儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 試劑配制
        1.2.2 細胞培養(yǎng)
        1.2.3 構(gòu)建4T1乳腺癌荷瘤小鼠模型
        1.2.4 磁珠分選小鼠脾臟細胞
        1.2.5 流式分選小鼠脾臟B細胞不同子集
        1.2.6 體外共培養(yǎng)
        1.2.7 流式細胞術(shù)檢測MDSC對 B細胞表面分子表達的影響
        1.2.8 ELISA法檢測MDSC對 B細胞分泌的細胞因子的影響
        1.2.9 BrdU摻入法檢測B細胞、T細胞增殖
        1.2.10 流式細胞術(shù)檢測B細胞、T細胞凋亡
        1.2.11 免疫組化評估荷瘤小鼠脾臟中MDSC和 B細胞的分布
        1.2.12 流式細胞術(shù)檢測T細胞分泌的IFN-γ
        1.2.13 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 成功構(gòu)建BALB/c小鼠4T1 乳腺癌模型
    2.2 MDSC對B細胞表型的調(diào)控
    2.3 MDSC對B細胞分泌抗體的調(diào)控
    2.4 MDSC促進B細胞的增殖,抑制B細胞的凋亡
    2.5 與MDSC共培養(yǎng)后的B細胞可以抑制T細胞增殖和IFN-γ的分泌
    2.6 與MDSC共培養(yǎng)后PD-1^-PD-L1⁺B細胞亞群比例增高
    2.7 PD-1^-PD-L1⁺B細胞具有免疫調(diào)節(jié)特性
    2.8 PD-1^-PD-L1⁺B細胞在骨髓、外周血、脾臟、淋巴結(jié)和腫瘤組織中的分布情況
    2.9 乳腺癌患者外周血中PD-1^-PD-L1⁺B 細胞明顯擴增
3 討論
    3.1 MDSC對B細胞正常免疫功能的調(diào)控
    3.2 MDSC調(diào)控B細胞的負性免疫調(diào)節(jié)功能
    3.3 MDSC誘導(dǎo)一群新的具有較強免疫抑制功能的PD-1^-PD-L1⁺B 細胞…
    3.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 調(diào)節(jié)性B細胞在乳腺癌中的研究進展
    綜述參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3816047