�、蛐蛦渭儼捳畈《�(Herpes simplex virus type Ⅱ,HSV-Ⅱ)的膜糖蛋白G(HSV-Ⅱ gG)在生物合成過(guò)程中被切割為兩個(gè)片段,然而,HSV-Ⅱ gG蛋白的切割位點(diǎn)迄今未被實(shí)驗(yàn)測(cè)定。HSV-Ⅱ gG上帶有大量的糖基化,然而糖基修飾在蛋白鏈上的分布還沒(méi)有詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)確定。在本研究中,中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)重組表達(dá)的HSV-Ⅱ gG的胞外區(qū)(HSV-Ⅱ gG ECD)的兩個(gè)切割產(chǎn)物(一個(gè)39kD,一個(gè)64kD)被用串聯(lián)液相色譜-質(zhì)譜(LC/MS)進(jìn)行肽圖分析。LC/MS肽圖分析顯示,39kD的產(chǎn)物是HSV-Ⅱ gG ECD蛋白切割后的N端片段,LC/MS肽圖分析可以確定HSV-Ⅱ gG ECD的肽鏈切割點(diǎn)在第335位氨基酸。親和層析和蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)顯示64kD產(chǎn)物是HSV-Ⅱ gG ECD蛋白切割后的C端片段。對(duì)兩個(gè)片段的糖基化分析顯示,39kD和64kD蛋白產(chǎn)物帶有相似程度的N-連接的糖基修飾(各片段帶兩個(gè)N-連接的糖基化),而O-連接的糖基化僅發(fā)生在64kD片段上,而且糖基化程度非常高(幾乎相當(dāng)于該段蛋白鏈本身的分子量)。本研究的結(jié)果支持HSV-Ⅱ gG...

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【文章目錄】：
材料與方法
    1穩(wěn)定表達(dá)HSV-II gG-ECD的CHO細(xì)胞株的篩選
    2 SDS-PAGE、Western Blot和LC/MS肽圖分析
    3HSV-II gG ECD的39kD和64kD蛋白產(chǎn)物的純化
    4HSV-II gG-ECD的蛋白產(chǎn)物的肽糖苷酶F(PNGase F）消化
    5HSV-II gG-ECD的蛋白產(chǎn)物的O-連接糖基化的檢驗(yàn)
結(jié)果
    1 CHO細(xì)胞表達(dá)的HSV-II gG ECD
    2HSV-II gG ECD兩個(gè)蛋白產(chǎn)物的液-質(zhì)肽譜分析
    3 HSV-II gG ECD的39kD和64kD蛋白產(chǎn)物的N-連接糖基化
    4HSV-II gG ECD的切割產(chǎn)物的O-連接的糖基化
討論



本文編號(hào)：3805611