發(fā)布時(shí)間：2023-04-03 01:23

　　【背景】漢灘病毒(hantaan virus,HTNV)屬于布尼亞病毒目漢坦病毒科正漢坦病毒屬,為基因組分節(jié)段的單負(fù)鏈RNA病毒,目前其感染和致病機(jī)制尚不完全清楚,尤其是子代病毒釋放的過(guò)程。成熟且具有感染力的病毒顆粒在細(xì)胞內(nèi)組裝后,需要通過(guò)出芽的方式釋放到細(xì)胞外,進(jìn)一步感染其它細(xì)胞,從而擴(kuò)大感染。多數(shù)負(fù)鏈RNA病毒依靠其基質(zhì)蛋白(matrix protein)提供的活性出芽,并通過(guò)其中的一些特定的保守結(jié)構(gòu)域牢固結(jié)合宿主內(nèi)吞體分選轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)合體(Endosomal sorting complex required for transport,ESCRT)來(lái)完成出芽小泡的形成和剪切分離,由于這些結(jié)構(gòu)域在病毒復(fù)制周期的晚期起作用,故稱其為晚期結(jié)構(gòu)域(late domain)。布尼亞病毒不具有基質(zhì)蛋白,但糖蛋白單獨(dú)表達(dá)可形成病毒樣顆粒(virus like particle,VLP),表明糖蛋白具有類似基質(zhì)蛋白的功能。在對(duì)不同漢坦病毒糖蛋白HTNV Gn-CT氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)后發(fā)現(xiàn),其中均含有一段保守的氨基酸序列Y-R-T-L,與經(jīng)典的晚期結(jié)構(gòu)域Y-P-x-L較為相似,故我們欲研究該序列在HTN...

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
縮略語(yǔ)表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文獻(xiàn)回顧
第一部分 HTNVGN-CTY-R-T-L序列對(duì)VLP釋放的影響
    1 材料
        1.1 菌種、載體
        1.2 細(xì)胞
        1.3 試劑
        1.4 培養(yǎng)液(基)與緩沖液
        1.5 儀器與器材
    2 方法
        2.1 HTNVGn-CT突變載體的構(gòu)建
        2.2 HTNVGn-CT突變對(duì)VLP釋放的影響
    3 結(jié)果
        3.1 成功構(gòu)建了HTNVGn-CTY-R-T-L序列的突變載體
        3.2 HTNVGn-CT中Y-R-T-L序列突變影響VLP的釋放
    4 討論
第二部分 明確參與HTNV出芽相關(guān)宿主ESCRT分子
    1 材料
        1.1 病毒
        1.2 細(xì)胞
        1.3 抗體
        1.4 其它試劑
        1.5 培養(yǎng)液(基)與緩沖液
        1.6 儀器與器材
    2 方法
        2.1 ESCRT關(guān)鍵分子ALIX、TSG101、Nedd4及Vps4AsiRNA的設(shè)計(jì)篩選及驗(yàn)證
        2.2 ESCRT關(guān)鍵分子表達(dá)降低對(duì)HTNV出芽的影響
    3 結(jié)果
        3.1 構(gòu)建的siRNA能有效抑制ALIX、TSG101、Nedd4及Vps4A表達(dá)
        3.2 ALIX、TSG101、Nedd4及Vps4A表達(dá)降低后可抑制HTNV出芽
    4 討論
第三部分 明確HTNVGN-CT與宿主ESCRT相互作用介導(dǎo)病毒出芽的機(jī)制
    1 材料
        1.1 病毒
        1.2 細(xì)胞
        1.3 抗體
        1.4 其它試劑
        1.5 培養(yǎng)液(基)與緩沖液
        1.6 儀器與器材
    2 方法
        2.1 篩選與HTNV包膜糖蛋白相互作用的分子
        2.2 明確ALIX與HTNVGn相互作用的位置
        2.3 檢測(cè)ALIX過(guò)表達(dá)對(duì)HTNV出芽的影響
    3 結(jié)果
        3.1 Co-IP檢測(cè)HTNVGn-CT與ALIX、Vps4A、Nedd4及TSG101的相互作用
        3.2 檢測(cè)HTNVGn-CT與ALIX相互作用位點(diǎn)
        3.3 檢測(cè)ALIX過(guò)表達(dá)對(duì)HTNVGn-CT相互作用的影響
        3.4 檢測(cè)ALIX過(guò)表達(dá)對(duì)HTNV出芽及HTNVVLP釋放的影響
    4 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果
致謝



本文編號(hào)：3780363