發(fā)布時間：2023-04-02 09:11

　　目的觀察二至丸對潑尼松龍誘導的斑馬魚骨質(zhì)疏松模型的治療療效,并明確其對破骨細胞分化的自噬調(diào)控機制。方法選取正常培養(yǎng)3 d后活力較好的斑馬魚幼魚,用25μmol/L潑尼松龍建立斑馬魚骨質(zhì)疏松癥模型,造模2 d后分組,分為空白組、模型組、依替磷酸二鈉(ED)組(300 mg/L)、墨旱蓮組(50μg/mL)、女貞子組(50μg/mL)和二至丸組(100μg/mL)。4 d后,用0.2%鈣黃綠素進行染色,拍照并統(tǒng)計斑馬魚脊椎骨熒光面積;實時熒光定量PCR檢測斑馬魚成骨分化基因堿性磷酸酶(ALP)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白2b(Bmp-2b)、Runt相關轉錄因子2(Runx2)和破骨分化基因組織蛋白酶K(CTSK)、活化T細胞核因子(NFATC-1)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的表達。培養(yǎng)RAW264.7細胞至80%～90%密度后分為空白組、LPS誘導組(10μg/L)、二至丸誘導組(100μg/mL)、墨旱蓮誘導組(50μg/mL)和女貞子誘導組(50μg/mL)。經(jīng)LPS誘導細胞破骨分化及藥物干預4 d后,實時熒光定量PCR檢測RAW264.7細胞TRAP、CTSK、NFATC-1和自噬相關基...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料及方法
    1.1 材料
        1.1.1 藥物與試劑
        1.1.2 實驗動物及細胞
        1.1.3 實驗儀器
    1.2 方法
        1.2.1 斑馬魚藥物濃度篩選
        1.2.2 斑馬魚骨質(zhì)疏松模型治療效果評價
        1.2.3 MTT比色法檢測RAW264.7細胞活力
        1.2.4 qPCR檢測各基因表達
        1.2.5 數(shù)據(jù)處理與分析
2 結果
    2.1 藥物安全性評價
    2.2 二至丸抗骨質(zhì)疏松活性評價
    2.3 二至丸方對成骨及破骨相關基因表達的影響
    2.4 二至丸對RAW264.7細胞增殖的影響
    2.5 二至丸對RAW264.7破骨分化的影響
    2.6 二至丸對RAW264.7破骨分化標志基因表達的影響
    2.7 二至丸對自噬相關基因表達的影響
3 討論



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