目的探討不同濃度梯度的剛地弓形蟲速殖子體外感染對侵蝕宿主細(xì)胞能力的影響及二者之間的最優(yōu)接種比。方法依照耗材規(guī)格和建議上液量,將宿主Vero細(xì)胞依次鋪入96孔、24孔、12孔、6孔細(xì)胞板和25T培養(yǎng)瓶后培養(yǎng)12 h;常規(guī)純化和計數(shù)VEG株速殖子并倍比稀釋出8個梯度,分別用來感染上述細(xì)胞,使首個感染量與宿主細(xì)胞鋪入數(shù)相等;繼續(xù)培養(yǎng)4 d后全量收集培養(yǎng)物,經(jīng)DNA提取和Real-time PCR定量檢測,以7種回歸模型對所得速殖子數(shù)的均值進(jìn)行擬合分析(n=3),選出最佳函數(shù)類型并求極值,以此明確弓形蟲感染與宿主細(xì)胞間的接種關(guān)系。結(jié)果 Real-time PCR定量結(jié)果顯示,VEG株速殖子最初感染量及所用耗材培養(yǎng)規(guī)格對弓形蟲侵蝕宿主細(xì)胞的能力均有影響,并且四次多項式函數(shù)為弓形蟲感染宿主細(xì)胞4 d時的最佳擬合曲線方程;經(jīng)求導(dǎo)和求極值發(fā)現(xiàn),同種耗材培養(yǎng)條件下,弓形蟲VEG株速殖子感染數(shù)與宿主Vero細(xì)胞間存在最優(yōu)接種比例關(guān)系。結(jié)論 96孔、24孔、12孔、6孔細(xì)胞板和25T培養(yǎng)瓶內(nèi)弓形蟲速殖子與宿主細(xì)胞間的接種比例依次為1/7.20、1/5.32、1/4.53、1/4.03和1/43.02。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材 料
        1.1.1 弓形蟲毒株與細(xì)胞系
        1.1.2 主要儀器、耗材和試劑
    1.2 方 法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 樣品收集與DNA提取
        1.2.3 Real-time PCR定量檢測
        1.2.4 曲線擬合與統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié) 果
    2.1 弓形蟲VEG株速殖子數(shù)
    2.2 曲線擬合與回歸趨勢分析
    2.3 參數(shù)統(tǒng)計與建議接種比
3 討 論



本文編號：3776606