目的探討微管切割蛋白Spastin對(duì)海馬神經(jīng)元樹突野形成的作用。方法把目的基因轉(zhuǎn)染入原代海馬神經(jīng)元,用免疫熒光顯示樹突α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑丙酸(AMPA)受體,全細(xì)胞膜片鉗檢測(cè)微小興奮性突觸后電流(mEPSCs)。結(jié)果過表達(dá)Spastin促進(jìn)樹突生長(zhǎng)以及分支形成,敲減Spastin抑制樹突的生長(zhǎng)和新的分支形成,與對(duì)照細(xì)胞差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Sholl分析結(jié)果顯示Spastin提高樹突野的復(fù)雜性(P<0.05);免疫熒光結(jié)果顯示,過表達(dá)Spastin促進(jìn)AMPA受體GluA2亞基在樹突的表達(dá),與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而敲減Spastin則抑制樹突GluA2的表達(dá)(P<0.05);全細(xì)胞膜片鉗檢測(cè)顯示,過表達(dá)Spastin神經(jīng)元的mEPSCs振幅和頻率均增加,敲減Spastin則使mEPSC的幅度和頻率降低(P<0.05)。結(jié)論 Spastin促進(jìn)神經(jīng)元樹突野的形成,而且形成的樹突是功能性樹突。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.1.2 主要試劑
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 Spastin過表達(dá)載體的構(gòu)建與轉(zhuǎn)染
        1.2.2 siRNA序列的合成與轉(zhuǎn)染
        1.2.3 原代海馬神經(jīng)元體外培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
        1.2.4 Western blot檢測(cè)
        1.2.5免疫熒光染色
        1.2.6 電生理檢測(cè)
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 過表達(dá)Spastin促進(jìn)海馬神經(jīng)元樹突生長(zhǎng)和分支形成
    2.2 敲減Spastin抑制海馬神經(jīng)元樹突生長(zhǎng)和分支形成
    2.3 Spastin促進(jìn)樹突AMPA受體GluA2亞基表達(dá)
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