目的對比不同消化方法對原代乳鼠心肌成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)的影響,探求更高效的細(xì)胞分離、培養(yǎng)方法。方法改良既往文獻(xiàn)報(bào)道的心肌成纖維細(xì)胞分離方法,選用膠原酶、胰酶、膠原酶加胰酶消化液分別對同等數(shù)量隨機(jī)挑選的同窩出生1～2 d的SD乳鼠進(jìn)行心肌成纖維細(xì)胞分離,從細(xì)胞數(shù)量及活性、細(xì)胞增殖、細(xì)胞純度及對中藥、西藥反應(yīng)靈敏度等方面對分離出的第0代(P0)細(xì)胞及傳代至第2代(P2)的細(xì)胞進(jìn)行比較。結(jié)果膠原酶消化法分離所得細(xì)胞在數(shù)量、成活率、貼壁速度、增殖速度方面,明顯優(yōu)于胰酶消化法或膠原酶加胰酶消化法,P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在形態(tài)學(xué)上并無明顯差異,且細(xì)胞純度均可達(dá)到95%;膠原酶消化法所得細(xì)胞對中藥、西藥靈敏度較高,P<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論選用膠原酶作為原代乳鼠心肌成纖維細(xì)胞的消化酶,運(yùn)用時間梯度消化細(xì)胞,可以高效得到數(shù)量多、活性好、純度高、對藥物反應(yīng)靈敏的細(xì)胞。

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 動物
    1.2 主要試劑、耗材、設(shè)備及儀器
        1.2.1 主要試劑
        1.2.2 主要耗材
        1.2.3 主要設(shè)備及儀器
    1.3 主要方法
        1.3.1 心肌成纖維細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        1.3.2 鑒定細(xì)胞數(shù)量及成活率
        1.3.3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        1.3.4 鑒定細(xì)胞增殖情況
        1.3.5 鑒定細(xì)胞純度
        1.3.6 Western blot法檢測血管緊張素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）干預(yù)后心肌成纖維細(xì)胞α-SMA的表達(dá)及對藥物的反應(yīng)
        1.3.7 統(tǒng)計(jì)方法
2 結(jié)果
    2.1 三種消化方法分離所得細(xì)胞P0代和P2代細(xì)胞數(shù)量及成活率比較
    2.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
    2.3 細(xì)胞增殖情況
    2.4 細(xì)胞純度檢測
    2.5 心肌成纖維細(xì)胞α-SMA蛋白表達(dá)情況
3 結(jié)論



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