本文關(guān)鍵詞：人臍帶MSCs移植對(duì)不可逆性梗阻性腎損傷模型大鼠治療作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:從形態(tài)學(xué)及細(xì)胞免疫表型兩個(gè)方面評(píng)判組織塊貼壁法分離人臍帶MSCs的可行性及生化功能的完好性,從生化指標(biāo)(血胱抑素C、血肌酐值水平)、腎組織切片HE染色以及腎組織中VEGF、CTGF兩項(xiàng)纖維化相關(guān)蛋白的表達(dá)水平三個(gè)不同角度研究人臍帶MSCs移植對(duì)不可逆性梗阻性腎損傷的治療和改善作用,為人臍帶MSCs在梗阻性腎病的臨床應(yīng)用提供進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)和理論支撐。方法:1運(yùn)用組織塊貼壁法分離新鮮臍帶的MSCs,在光鏡下觀察提取的人臍帶MSCs的細(xì)胞形態(tài),運(yùn)用流式細(xì)胞檢測(cè)儀測(cè)定細(xì)胞的免疫表型。2選取清潔級(jí)大鼠90只,隨機(jī)分成模型組(單側(cè)輸尿管梗阻組,n=30,大鼠行右側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù),術(shù)后10天尾靜脈注射生理鹽水1ml),治療組(單側(cè)輸尿管梗阻+人臍帶MSCs移植組,n=30,大鼠行右側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù),術(shù)后10天尾靜脈注射含1×107MSCs的生理鹽水lml)和對(duì)照組(假手術(shù)組,n=30,分離右輸尿管但不結(jié)扎輸尿管,術(shù)后10天經(jīng)尾靜脈注生理鹽水lml)。三組大鼠分別于人臍帶MSCs移植后1周、2周、4周共3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各取10只,抽血后處死取腎標(biāo)本,行血胱抑素C水平、血肌酐值的測(cè)定,腎組織切片HE染色的觀察以及腎組織中VEGF、CTGF兩項(xiàng)纖維化相關(guān)分子在Western Blot檢測(cè)中的表達(dá)水平的研究。3實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用SPSS Statistics 19軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,其中計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(sx±)表示。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為P=0.05。結(jié)果:1組織塊貼壁法提取的人臍帶MSCs,在顯微鏡下可觀察到與成纖維細(xì)胞形態(tài)相似的細(xì)胞。流式細(xì)胞檢測(cè)示分離細(xì)胞表達(dá)CD90、CD73、CD105而不表達(dá)CD19、CD34、CD45、CD116及HLA-DR,其免疫表型符合人間充質(zhì)干細(xì)胞特征。2在人臍帶MSCs移植后不同時(shí)間點(diǎn),模型組和治療組大鼠同組間測(cè)得的血肌酐值和血胱抑素C水平均有顯著差異(P0.05),而在同一時(shí)間點(diǎn)三組間的這兩項(xiàng)指標(biāo)亦有明顯的差異(P0.05)。3在人臍帶MSCs移植后不同時(shí)間點(diǎn),治療組與模型組的腎組織病理改變均表現(xiàn)為明顯的腎小管空泡樣擴(kuò)張、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和間質(zhì)纖維化改變。組織病理學(xué)評(píng)分方面,模型組在移植后早期相對(duì)較輕,而2W后則持續(xù)惡化(P0.05)。此外,治療組病理?yè)p傷嚴(yán)重程度明顯較同一時(shí)間點(diǎn)的模型組輕,但是在2W后也出現(xiàn)惡化趨勢(shì)(P0.05)。4模型組VEGF蛋白表達(dá)水平隨時(shí)間進(jìn)展呈先增加后減少趨勢(shì),且在人臍帶MSCs移植后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)水平均較對(duì)照組強(qiáng)(P0.05),治療組在移植后1W時(shí)VEGF蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組明顯增強(qiáng),在2W時(shí)到達(dá)頂峰,之后再度出現(xiàn)下降且在4W時(shí)弱于同組1W時(shí)表達(dá)量(P0.05)。5對(duì)照組CTGF蛋白表達(dá)水平最弱(P0.05),模型組與治療組均在移植后1W時(shí)的表達(dá)量最高,往后隨時(shí)間進(jìn)展呈遞減趨勢(shì),至移植后4W達(dá)最低水平(P0.05),但無(wú)論在移植后哪個(gè)時(shí)間點(diǎn),治療組CTGF蛋白表達(dá)水平始終較模型組弱(P0.05)。結(jié)論:1組織塊貼壁法提取人臍帶MSCs具有可行性,獲取的MSCs在傳代培養(yǎng)、分化和免疫等功能的發(fā)揮上也具有充分的優(yōu)勢(shì)。2人臍帶MSCs移植能夠幫助改善不可逆性梗阻性腎損傷的腎功能,降低血肌酐值和血胱抑素C水平。血胱抑素C水平與血肌酐值水平均可作為評(píng)價(jià)梗阻性腎病病情發(fā)展及改善的指標(biāo),兩項(xiàng)指標(biāo)變化趨勢(shì)基本一致,且血胱抑素C水平敏感性較血肌酐值更優(yōu)。3人臍帶MSCs移植對(duì)于治療不可逆性梗阻性腎損傷有效,可以減輕管周間質(zhì)的炎性浸潤(rùn),抑制腎小管上皮細(xì)胞凋亡以及幫助腎小管上皮細(xì)胞的修復(fù),且在治療早期(移植后約2W內(nèi))效果最佳,單次注射后明顯治療效果一般持續(xù)至2W左右,維持療效需多次注射。4 VEGF、CTGF的表達(dá)水平與梗阻性腎病間質(zhì)纖維化進(jìn)展程度具有相關(guān)性。其中,VEGF表達(dá)水平與纖維化程度負(fù)相關(guān),CTGF表達(dá)水平與纖維化程度正相關(guān)。梗阻性腎損傷時(shí),腎臟本身具有調(diào)節(jié)代償及自我修復(fù)作用,但始終無(wú)法阻止腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)程。人臍帶MSCs具有顯著的促腎微血管修復(fù)、抗間質(zhì)纖維化的作用,但該作用也隨時(shí)間進(jìn)展,伴隨著人臍帶MSCs的衰減凋亡和體內(nèi)連續(xù)傳代過(guò)程中免疫調(diào)節(jié)能力的消失而逐漸下降。5人臍帶MSCs移植的具體頻次及劑量標(biāo)準(zhǔn)目前仍不明確,將是下一步的研究方向。
【關(guān)鍵詞】：人臍帶MSCs移植 不可逆性梗阻性腎損害 組織塊貼壁法 VEGF CTGF
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R692;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫(xiě)11-12
• 前言12
• 材料與方法12-19
• 結(jié)果19-22
• 附圖22-31
• 附表31-34
• 討論34-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述MSCs對(duì)腎臟缺血再灌注損傷改善作用的研究進(jìn)展44-55
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 致謝55-56
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷56

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本文編號(hào)：377217