作為生物體內(nèi)極為重要的細(xì)胞因子,轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)調(diào)控了細(xì)胞增殖、分化、凋亡以及胚胎發(fā)育等一系列生理過程。經(jīng)典的TGF-β信號(hào)通路起始于TGF-β配體結(jié)合受體,之后Ⅱ型受體磷酸化Ⅰ型受體招募并磷酸化受體調(diào)節(jié)型Smad(Receptor-activated Smad,R-Smad,如Smad2和Smad3);磷酸化后的 R-Smad 和通用轉(zhuǎn)導(dǎo)型 Smad(Commonmediator Smad,Co-Smad,即Smad4)結(jié)合形成復(fù)合物入核,進(jìn)而調(diào)控下游基因。TGF-p信號(hào)通路還受到抑制型 Smad(Inhibitory Smad,Ⅰ-Smad,即 Smad6 和 Smad7)負(fù)向調(diào)控,如 Smad7 可以招募E3連接酶Smurf2導(dǎo)致Ⅰ型受體降解從而抑制TGF-p信號(hào)通路。TGF-β信號(hào)通路的異常調(diào)控可能引發(fā)多種疾病,如免疫性疾病、組織纖維化、心血管疾病、胚胎發(fā)育異常和腫瘤等。TGF-β在癌癥的發(fā)展過程中具有十分重要的雙向調(diào)控作用。在癌癥早期,TGF-β通過抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡等起到抑癌作用;而在癌癥發(fā)生晚期,TGF...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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1. 緒論
    1.1. TGF-β信號(hào)通路
        1.1.1. TGF-β信號(hào)通路概況
        1.1.2. TGF-β信號(hào)通路配體
        1.1.3. TGF-β信號(hào)通路受體
        1.1.4. Smad蛋白
        1.1.5. TGF-β不依賴于Smad蛋白信號(hào)通路
        1.1.6. TGF-β信號(hào)通路功能
    1.2. 蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶
        1.2.1. 蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶的分類
        1.2.2. 蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶的功能
    1.3. PTPN3
        1.3.1. PTPN3概況
        1.3.2. PTPN3功能
2. 材料和方法
    2.1. 材料
        2.1.1. 細(xì)胞和菌株
        2.1.2. 質(zhì)粒
        2.1.3. 抗體
        2.1.4. 主要試劑
        2.1.5. qRT-PCR引物
        2.1.6. 儀器設(shè)備
        2.1.7. 常規(guī)試劑配制
    2.2. 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        2.2.1. 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.3. 慢病毒包裝以及穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的構(gòu)建
        2.2.4. siRNA干擾實(shí)驗(yàn)
        2.2.5. MTS實(shí)驗(yàn)
        2.2.6. 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        2.2.7. 細(xì)胞RNA的提取
        2.2.8. mRNA的逆轉(zhuǎn)錄
        2.2.9. 熒光實(shí)時(shí)定量PCR
        2.2.10. 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.11. 免疫熒光
        2.2.12. 蛋白免疫印記實(shí)驗(yàn)
        2.2.13. 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
        2.2.14. 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.2.15. 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.2.16. 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
3. 結(jié)果與分析
    3.1. PTPN3促進(jìn)TGF-β信號(hào)通路
        3.1.1. PTPN3促進(jìn)TGF-β信號(hào)通路誘導(dǎo)的報(bào)告基因活性
        3.1.2. 敲減PTPN3降低TGF-β信號(hào)通路誘導(dǎo)的報(bào)告基因活性
        3.1.3. 敲減PTPN3削弱TGF-β信號(hào)通路誘導(dǎo)的下游基因響應(yīng)
        3.1.4. PTPN3促進(jìn)TGF-β信號(hào)通路誘導(dǎo)的下游基因響應(yīng)
    3.2. PTPN3促進(jìn)TGF-β信號(hào)通路的分子機(jī)制
        3.2.1. PTPN3促進(jìn)TGF-β信號(hào)通路不依賴它的磷酸酶活性
        3.2.2. L232R使PTPN3喪失促進(jìn)TGF-β信號(hào)通路的作用
        3.2.3. PTPN3能夠穩(wěn)定TβRI蛋白表達(dá)
        3.2.4. PTPN3降低TβRI泛素化
        3.2.5. PTPN3阻滯Smurf2誘導(dǎo)的TβRI降解
        3.2.6. PTPN3削弱Smurf2和TβRI相互作用
    3.3. PTPN3對(duì)于TGF-β信號(hào)通路功能的調(diào)控
        3.3.1. PTPN3增強(qiáng)TGF-β的生長(zhǎng)抑制功能
        3.3.2. 敲減PTPN3削弱TGF-β信號(hào)通路誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制反應(yīng)
        3.3.3. 敲減PTPN3削弱TGF-β信號(hào)通路的腫瘤抑制功能
        3.3.4. 敲減PTPN3抑制TGF-β誘導(dǎo)的EMT
        3.3.5. PTPN3促進(jìn)TGF-β信號(hào)通路的工作模型
4. 討論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3754098