研究背景:多能性干細(xì)胞（pluripotent stem cells,PSCs）因其無限的自我更新及向三個胚層分化的多能性,在發(fā)育生物學(xué)及再生醫(yī)學(xué)中擁有巨大的應(yīng)用潛能。PSCs包括由哺乳動物囊胚中的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離而來的胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cells,ESCs）及由體細(xì)胞過表達(dá)Oct4 Sox2,Klf-4,c-Myc（OSKM）四種轉(zhuǎn)錄因子重編程而產(chǎn)生的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cells,iPSCs）。其中iPSCs來源于自體體細(xì)胞,回避了 ESCs應(yīng)用時的倫理爭議,且避免了異體移植產(chǎn)生的免疫排異,因此應(yīng)用前景更廣。然而,目前的重編程體系存在效率低、耗時長的瓶頸,阻礙了 iPSCs在再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。近期的研究發(fā)現(xiàn)長鏈非編碼RNA（lnon-coding RNA,lncRNA）在重編程及多能性的維持上可能具有重要的調(diào)控作用。lncRNAs的長度一般超過200個核苷酸,此類RNAs雖然不編碼蛋白質(zhì),但以其獨(dú)特的方式在多種層面上調(diào)控基因的表達(dá),包括轉(zhuǎn)錄層面、轉(zhuǎn)錄后層面及蛋白質(zhì)層面等等。通常,物種越復(fù)雜,lncRNAs的種類越繁多... 

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
abstract
中英文縮略詞對照表
第1章 緒論
    1.1 iPSCs的應(yīng)用現(xiàn)狀
        1.1.1 iPSCs的應(yīng)用前景
        1.1.2 iPSCs的應(yīng)用瓶頸
    1.2 體細(xì)胞重編程的分子機(jī)制
        1.2.1 重編程進(jìn)程
        1.2.2 表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制
    1.3 提高重編程效率的研究進(jìn)展
        1.3.1 添加高通量小分子
        1.3.2 改變誘導(dǎo)體系及環(huán)境
        1.3.3 尋找新的調(diào)控因子
    1.4 長鏈非編碼RNA
        1.4.1 lncRNA的分類
        1.4.2 lncRNA的作用機(jī)制
        1.4.3 lncRNA對重編程的調(diào)控
    1.5 增強(qiáng)子RNA
        1.5.1 eRNAs的特點(diǎn)
        1.5.2 eRNAs的作用機(jī)制
        1.5.3 eRNAs對重編程的影響
    1.6 立項(xiàng)依據(jù)——lncRNA Oeblr20的作用及機(jī)制研究
第2章 研究路線
    2.1 特點(diǎn)及全長分析
    2.2 功能研究
    2.3 機(jī)制探索
第3章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞
        3.1.2 質(zhì)粒
        3.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑及配方
        3.1.4 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)所需試劑及配方
        3.1.5 實(shí)驗(yàn)所需儀器
        3.1.6 實(shí)驗(yàn)所需耗材
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 RNA提取及cDNA合成
        3.2.3 擬胚體分化實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 實(shí)時定量 PCR (Real-time PCR)
        3.2.5 Oeblr20全長序列分析
        3.2.6 構(gòu)建質(zhì)粒
        3.2.7 慢病毒包裝及感染
        3.2.8 重編程試驗(yàn)
        3.2.9 免疫熒光染色
        3.2.10 RAN逆轉(zhuǎn)錄相關(guān)捕獲技術(shù)
        3.2.11 RNA-DNA FISH
        3.2.12 Luciferase雙熒光素酶報告系統(tǒng)
        3.2.13 DNA提取
        3.2.14 甲基化水平測定
        3.2.15 染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)
        3.2.16 RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀技術(shù)
    3.3 實(shí)驗(yàn)所需引物信息
    3.4 統(tǒng)計學(xué)分析
第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
    4.1 多能性lncRNA Oeblr20的發(fā)現(xiàn)及鑒定
        4.1.1 RNA-Seq
        4.1.2 RAT-Seq
    4.2 Oeblr20特點(diǎn)及全長分析
        4.2.1 Oeblr20在細(xì)胞及組織中的差異性表達(dá)
        4.2.2 擬胚體分化實(shí)驗(yàn)
        4.2.3 亞細(xì)胞定位
        4.2.4 Oeblr20全長序列信息
    4.3 Oeblr20的功能研究
        4.3.1 Oeblr20維持干細(xì)胞多能性
        4.3.2 促進(jìn)多能性基因表達(dá)——過表達(dá)實(shí)驗(yàn)
        4.3.3 提高iPSCs誘導(dǎo)效率及多能性——重編程試驗(yàn)
    4.4 Oeblr20的機(jī)制探索
        4.4.1 Oct4增強(qiáng)子為Oeblr20的作用靶點(diǎn)
        4.4.2 Oeblr20表觀遺傳學(xué)調(diào)控Oct4增強(qiáng)子RNA表達(dá)
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3732401