研究背景:多能性干細(xì)胞（pluripotent stem cells,PSCs）因其無(wú)限的自我更新及向三個(gè)胚層分化的多能性,在發(fā)育生物學(xué)及再生醫(yī)學(xué)中擁有巨大的應(yīng)用潛能。PSCs包括由哺乳動(dòng)物囊胚中的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離而來(lái)的胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cells,ESCs）及由體細(xì)胞過(guò)表達(dá)Oct4 Sox2,Klf-4,c-Myc（OSKM）四種轉(zhuǎn)錄因子重編程而產(chǎn)生的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cells,iPSCs）。其中iPSCs來(lái)源于自體體細(xì)胞,回避了 ESCs應(yīng)用時(shí)的倫理爭(zhēng)議,且避免了異體移植產(chǎn)生的免疫排異,因此應(yīng)用前景更廣。然而,目前的重編程體系存在效率低、耗時(shí)長(zhǎng)的瓶頸,阻礙了 iPSCs在再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。近期的研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lnon-coding RNA,lncRNA）在重編程及多能性的維持上可能具有重要的調(diào)控作用。lncRNAs的長(zhǎng)度一般超過(guò)200個(gè)核苷酸,此類RNAs雖然不編碼蛋白質(zhì),但以其獨(dú)特的方式在多種層面上調(diào)控基因的表達(dá),包括轉(zhuǎn)錄層面、轉(zhuǎn)錄后層面及蛋白質(zhì)層面等等。通常,物種越復(fù)雜,lncRNAs的種類越繁多... 

【文章頁(yè)數(shù)】：105 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
abstract
中英文縮略詞對(duì)照表
第1章 緒論
    1.1 iPSCs的應(yīng)用現(xiàn)狀
        1.1.1 iPSCs的應(yīng)用前景
        1.1.2 iPSCs的應(yīng)用瓶頸
    1.2 體細(xì)胞重編程的分子機(jī)制
        1.2.1 重編程進(jìn)程
        1.2.2 表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制
    1.3 提高重編程效率的研究進(jìn)展
        1.3.1 添加高通量小分子
        1.3.2 改變誘導(dǎo)體系及環(huán)境
        1.3.3 尋找新的調(diào)控因子
    1.4 長(zhǎng)鏈非編碼RNA
        1.4.1 lncRNA的分類
        1.4.2 lncRNA的作用機(jī)制
        1.4.3 lncRNA對(duì)重編程的調(diào)控
    1.5 增強(qiáng)子RNA
        1.5.1 eRNAs的特點(diǎn)
        1.5.2 eRNAs的作用機(jī)制
        1.5.3 eRNAs對(duì)重編程的影響
    1.6 立項(xiàng)依據(jù)——lncRNA Oeblr20的作用及機(jī)制研究
第2章 研究路線
    2.1 特點(diǎn)及全長(zhǎng)分析
    2.2 功能研究
    2.3 機(jī)制探索
第3章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞
        3.1.2 質(zhì)粒
        3.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑及配方
        3.1.4 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)所需試劑及配方
        3.1.5 實(shí)驗(yàn)所需儀器
        3.1.6 實(shí)驗(yàn)所需耗材
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 RNA提取及cDNA合成
        3.2.3 擬胚體分化實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 實(shí)時(shí)定量 PCR (Real-time PCR)
        3.2.5 Oeblr20全長(zhǎng)序列分析
        3.2.6 構(gòu)建質(zhì)粒
        3.2.7 慢病毒包裝及感染
        3.2.8 重編程試驗(yàn)
        3.2.9 免疫熒光染色
        3.2.10 RAN逆轉(zhuǎn)錄相關(guān)捕獲技術(shù)
        3.2.11 RNA-DNA FISH
        3.2.12 Luciferase雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)
        3.2.13 DNA提取
        3.2.14 甲基化水平測(cè)定
        3.2.15 染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)
        3.2.16 RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀技術(shù)
    3.3 實(shí)驗(yàn)所需引物信息
    3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
    4.1 多能性lncRNA Oeblr20的發(fā)現(xiàn)及鑒定
        4.1.1 RNA-Seq
        4.1.2 RAT-Seq
    4.2 Oeblr20特點(diǎn)及全長(zhǎng)分析
        4.2.1 Oeblr20在細(xì)胞及組織中的差異性表達(dá)
        4.2.2 擬胚體分化實(shí)驗(yàn)
        4.2.3 亞細(xì)胞定位
        4.2.4 Oeblr20全長(zhǎng)序列信息
    4.3 Oeblr20的功能研究
        4.3.1 Oeblr20維持干細(xì)胞多能性
        4.3.2 促進(jìn)多能性基因表達(dá)——過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)
        4.3.3 提高iPSCs誘導(dǎo)效率及多能性——重編程試驗(yàn)
    4.4 Oeblr20的機(jī)制探索
        4.4.1 Oct4增強(qiáng)子為Oeblr20的作用靶點(diǎn)
        4.4.2 Oeblr20表觀遺傳學(xué)調(diào)控Oct4增強(qiáng)子RNA表達(dá)
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3732401